Avaliação das alterações teciduais em diferentes modelos de indução de doença periodontal em camundongo / Evaluation of tissue changes in different models of induced periodontal disease in mice

RESUMO

A periodontite é uma doença infecciosa caracterizada pela destruição do tecido ósseo alveolar, mediada e modulada pelo hospedeiro frente aos microrganismos provenientes do biofilme dental. Compreender a origem e a evolução da reabsorção de osso alveolar é uma das metas primordiais da pesquisa periodontal, sobretudo visando o estabelecimento de novas modalidades terapêuticas. O desenvolvimento de modelos experimentais torna-se importante e é um passo necessário antes de ingressar em experimentações clínicas com novas terapias de tratamentos. Sendo assim, o presente estudo apresenta como objetivos caracterizar e avaliar as alterações teciduais provocadas por diferentes modelos de doença periodontal experimental em camundongos. Para isto, foram utilizados camundongos C57/BL6 wild type (WT), fêmeas distribuídas em 5 grupos experimentais seguindo os períodos de sacrifício 7, 15 e 30 dias após o início da indução da doença (n=6 animais/período/grupo). O Grupo C correspondeu ao grupo controle; no Grupo L a doença periodontal foi induzida por meio de ligaduras; nos Grupos G-Pg e G-PgFn foram realizadas gavagem com Porphyromonas gingivalis e Porphyromonas gingivalis + Fusobacterium nucleatum respectivamente; no Grupo I-Pg foi injetado Porphyromonas gingivalis inativada por calor na mucosa palatina entre os molares. As amostras obtidas foram utilizadas para avaliação do processo imuno-inflamatório presente no tecido gengival, por meio de análise histológica descritiva, e RT-PCR em tempo real. A avaliação da perda óssea alveolar foi avaliada por microtomografia comutadorizada (µCT). Apenas os modelos de ligadura e de injeção de Porphyromonas gingivalis inativada por calor apresentaram significante perda óssea alveolar, no período de 30 dias, comparado ao grupo controle e os demais grupos. Houve aumento significante (p<0.05) na expressão gênica do mediador inflamatório IL-6 e na proteína RANKL envolvida no processo de osteoclastogenese no grupo ligadura em relação ao grupo controle. Os modelos de ligadura e de injeção de Porphyromonas gingivalis inativada por calor foram os mais representativos da doença periodontal em humanos, enquanto que os modelos de gavagem não foram efetivos em induzir doença, nas condições estudadas

ABSTRACT

Periodontitis is an infectious disease characterized by the destruction of alveolar bone tissue, mediated and modulated by the host response against the microorganisms from the biofilm. Understanding the origin and evolution of the alveolar bone resorption is one of the primary goals of periodontal research, especially to stop the disease progression and improve future treatments. For this, the development of experimental models is important and a necessary step before entering into clinical trials with new treatment therapies. Therefore, the aim of this study was to characterize and evaluate tissue changes caused by different experimental models of periodontal disease in mice. We used C57/BL6 wild type mice (WT), females, distributed into 5 experimental groups and sacrificed at 7, 15 and 30 days after periodontal disease induction (n=6 animals/period/group). Group C was the control group; Group L periodontal disease was induced by ligature; in Groups G-Pg and G-PgFn oral gavage with Porphyromonas gingivalis and Fusobacterium nucleatum + Porphyromonas gingivalis were performed, respectively; in Group I-Pg heat killed Porphyromonas gingivalis was injected in the palatal mucosa between the molars. The samples were used for analysis of the immune-inflammatory process in the gingival tissue by histological descriptive analysis and real time RT-PCR analyses. The alveolar bone loss was evaluated by micro-computerized tomography (µCT). Only ligature and injection of Porphyromonas gingivalis heat-killed models showed significant alveolar bone loss in 30 day period compared to the control and the others groups. There were a significant increase (p <0.05) in gene expression of inflammatory mediator IL-6 and proteins involved in osteoclastogenesis RANKL in ligature group compared with the control group. The ligature and injection of heat-killed Porphyromonas gingivalis models were the most representative of periodontal disease in humans, while oral gavage models were not effective to induce the disease, in the studied conditions