Displacers improve the selectivity of phosphopeptide enrichment by metal oxide affinity chromatography / Uso de desplazadores para mejorar la selectividad de los fosfopéptidos enriquecidos por cromatografía de afinidad con óxidos de metales
Bol. méd. Hosp. Infant. Méx
;
74(3): 200-207, May.-Jun. 2017. tab, graf
Artículo
en Inglés
| LILACS
| ID: biblio-888616
ABSTRACT
Abstract Background:
A key process in cell regulation is protein phosphorylation, which is catalyzed by protein kinases and phosphatases. However, phosphoproteomics studies are difficult because of the complexity of protein phosphorylation and the number of phosphorylation sites.Methods:
We describe an efficient approach analyzing phosphopeptides in single, separated protein by two-dimensional gel electrophoresis. In this method, a titanium oxide (TiO2)-packed NuTip is used as a phosphopeptide trap, together with displacers as lactic acid in the loading buffer to increase the efficiency of the interaction between TiO2 and phosphorylated peptides.Results:
The results were obtained from the comparison of mass spectra of proteolytic peptides of proteins with a matrix-assisted laser desorption-ionization-time of flight (MALDI-TOF) instrument.Conclusions:
This method has been applied to identifying phosphoproteins involved in the symbiosis Rhizobium etli-Phaseolus vulgaris.RESUMEN
Resumen Introducción:
Un proceso clave en la regulación celular es la fosforilación de proteínas, que se lleva a cabo por cinasas y fosfatasas. Sin embargo, los estudios de fosfoproteómica son difíciles debido a la complejidad de la fosforilación proteica y el número de sitios de fosforilación.Métodos:
En el presente trabajo se describe una eficiente estrategia metodológica para analizar fosfopéptidos de proteínas separadas mediante electroforesis bidimensional. En este método, una columna con microesferas de dióxido de titanio (TiO2/NuTip) se utilizó para atrapar los fosfopéptidos en la superficie del TiO2 previamente empacado en una punta. El uso de desplazadores en el buffer de carga, como el ácido láctico, mejoró significativamente la selectividad.Resultados:
Los resultados se obtuvieron mediante la comparación de los espectros de masas de péptidos proteolíticos de proteínas analizados utilizando un instrumento de desorción/ionización láser asistida por matriz-tiempo de vuelo (MALDI-TOF).Conclusiones:
Este método se ha aplicado para la identificación de fosfoproteínas involucradas en la simbiosis del Rhizobium etli con Phaseolus vulgaris.
Bacterias Gram-negativas; Cromatografía de afinidad con óxidos de metales; Espectrometría de masas; Gram-negative bacteria; Ionización láser asistida por matriz-tiempo de vuelo (MALDI-TOF); Mass spectrometry; Matrix-assisted laser desorption-ionization-time of flight (MALDI-TOF); Metal oxide affinity chromatography (MOAC)
Texto completo:
Disponible
Índice:
LILACS (Américas)
Asunto principal:
Fosfopéptidos
/
Fosfoproteínas
/
Titanio
/
Cromatografía de Afinidad
Idioma:
Inglés
Revista:
Bol. méd. Hosp. Infant. Méx
Asunto de la revista:
Pediatría
Año:
2017
Tipo del documento:
Artículo
/
Documento de proyecto
País de afiliación:
México
Institución/País de afiliación:
Universidad Nacional Autónoma de México/MX
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