Estudo da expressão dos antígenos de superficíe celular, CD25 e CD69, em linfócitos ativados por PHA e TPA, e tratados com tapsigargina, trifluoperazina e ouabaína

RESUMO

Neste trabalho estudamos a ação de TG, TFP e OUA (substâncias conhecidas por alterar o "fluxo iônico" da célula) sobre a expressão de dois antígenos de membrana, o CD25 e o CD69, em células ativadas por PHA e por TPA. O CD25 é a cadeia do receptor de IL-2 que se expressa na membrana algumas horas após a ativação. O CD69, membro da família das selectinas, é rapidamente expresso após a ativação. Além do PHA e TPA, outra substância que por si só levou à expressão de CD25 e de CD69 foi a TG. Em células ativadas por PHA, TG promoveu um aumento na expressão destas moléculas; em células ativadas por TPA este efeito foi verificado sobre a expressão de CD25, não havendo modificação na expressão de CD69. Esta substância apresentou efeitos diversos sobre a proliferação e citotoxidade celular inibiu a proliferação celular induzida por PHA, mas não por TPA; inibiu a citotoxcidade mediada por células NK em repouso, mas as células LAK mostraram-se mais resisitentes ao seu efeito. Estes resultados sugerem a existência de diferentes vias para a proliferação e para a expressão de CD25, demonstrando que a inibição da proliferação não está necessariamente relacionada com a presença de CD25; também demonstraram um mecanismo de citotoxidade distinto atuando em células NK em repouso e ativadas (LAK). Os efeitos de TFP inibindo a proliferação, de células ativadas por PHA E tpa, e a citotoxidade mediada por células NK e LAK, já são conhecidos. TFP também inibiu a expressão CD69 e de CD25 em células ativadas por PHA, excetuando a expressão de CD25, nas primeiras horas após estímulo. A última substância estudada foi a OUA, conhecida por inibir a proliferação celular de células ativadas por PHA e por TPA, e não interferir na citotoxidade de células NK e LAK. Nossos resultados mostraram que OUA inibiu a expressão de CD25, em células ativadas por PHA, OUA promoveu aumento na expressão de CD69; embora em células ativadas por TPA, OUA não tenha interferido no número de células expressando esta molécula, em momentos tardios OUA promoveu um aumento percentual na expressão de CD69 nestas células. A inibição de CD25 por OUA, em células ativadas por PHA, pode ser uma das justificativas para a inibição da proliferação nestas células; mas não se aplica à inibição da proliferação em células ativadas por TPA. Nós demonstramos que OUA inibiu a progressão da fase de G1 para a S. Já está descrito na literatura que a ativação linfocitária via CD69 leva a um aumento no c-myc. Dados do nosso laboratório demonstraram que células ativadas por PHA e tratadas com OUA também promovem um aumento de c-myc e levam a apoptose. Estes dados parecem indicar um possível papel para o CD69 também na morte celular. Nós verificamos que um mesmo sinal (PHA) pode levar a dissociação de resposta para a aexpressão de CD25 e CD69, em uma mesma célula. Os nossos resultados, aliados aos dados da literatura, demonstraram o envolvimento de diferentes vias de ativação conduzindo à proliferação, à citotoxidade e provavelmente à morte celular e a possibilidade de que um mesmo estímulo seja capaz de ativar mais de uma dessas vias.

ABSTRACT

In the present work the action of TG, TFP and OUA (substances known to alter ion fluxes) was studied with regard to the expression of two membrane antigens CD25 and CD69 in cells activated by PHA and TPA. CD25 is the a chain of the IL-2 receptor which is expressed hours after activation. CD69, a member of the selectin family is rapidly expressed following activation. Besides PHA and TPA, another substance TG was also capable of inducing the expression of CD25 and CD69. TG promoted an increase in the expression of these molecules on cells activated by PHA whereas cells activated by TPA showed an increase in CD25 with no modification of CD69 expression. This substance produced diverse effects on proliferation and cellular cytotoxicity, it inhibited cellular proliferation induced by PHA but not by TPA and inhibited NK cells cytotoxicity but LAK cells were more resistance to its inhibitory effect. These results suggest the existence of different signaling pathways for proliferation and CD25 expression, demonstrating that proliferation inhibition is not necessarily related to the presence of CD25, they also suggest distinct cytotoxic mechanism in resting and activated NK cells. The inhibitory effect of TFP on proliferation induced by PHA and TPA; and on cytotoxicity mediated by NK and LAK cells is already known. TFP also inhibited CD69 and CD25 expression on PHA-activated cells, with the exception of the expression of CD25 on the first hours after activation with remains unchanged. The last substance studied by us was OUA, known to inhibit cellular proliferation of following activation by PHA and TPA and not to interfere with NK and LAK cytotoxicity. Our results shown that OUA inhibited CD25 expression on PHAactivated cells but not on TPA. OUA produced an increase of CD69 expression on PHA-activated cells. However, although OUA did not interfere in the number of cells expressing this molecule it augmenting at latter times the percentage of cells expressing high levels of CD69. CD25 inhibition on PHA activated cells not clarify inhibition of TPA-activated cells. Our results demonstreted that OUA inhibited the progression from G1 to S phase in both cultures. It has been already described that lymphocyte activation via CD69 leady to an increase of c-myc. Data from our laboratory demonstrated that PHA activated cells treated with OUA also promoted an increase in c-myc leading to apoptosis. This results seem to indicated a possible role of CD69 in cell death. We have seem that the same stimulus (PHA) may produce in the same cell a dissociated response with regard the expression of CD25 and CD69. Our results together with the datas from literature indicated the involvement of different activation pathways inducting to proliferation, cytotoxicity and cell death, and the possibility that the same stimulus may activate more than one pathway.