Diferenciação celular in vitro em leucemias humanas em função da resposta ao diéster de forbol (TPA) e ácido retinóico

RESUMO

O efeito do TPA (12-0-tetradecanoilforbol-13-acetado) e AR (ácido retinóico) foi testado nas linhagens celulares HL-60 (leucemia promielocítica aguda), K562 (eritroleucemia) e células de pacientes com vários tipos de leucemias (11 casos de leucemia linfóide aguda-LLA, 2 casos de leucemia linfocítica crônicas-LLC e 19 casos de leucemia mielóide aguda-LMA-M1 a M7). A exposição ao TPA induziu diferentes mudanças nas células leucêmicas. Em todos os casos estudados, as células linfóides permaneceram com leucemia mielóide, aderiram ao substrato, enquanto que as células linfóides, permaneceram em suspensão, permitindo distinguir blastos mielóide de linfóides. A única exceção foi um caso de LLC, com células que se tornaram aderentes e mostraram características do tipo tricoleucemia. Além disso, houve um aumento de fagocitose, após tratamento com TPA, permitindo não somente distinguir mielóide de linfóide, pois a maioria das células mielóides são fagocítica, mas também caracterizar a leucemia tipo M7, sendo a única com atividade fagocítica negativa. Subtipos de leucemia mielóide puderam ser discriminados através da produção de lisozima após exposição ao TPA M4 e M5, sendo os únicos que apresentaram tal aumento. Um outro parâmetro considerado baseou-se em que todas as células mielóides estudadas apresentaram um aumento de células esterase positiva depois do tratamento com TPA, com exceção das células M1, que eram negativas e assim permaneceram independente de qualquer tratamento. Foi demonstrado que TPA e AR podem levar a dois caminhos diferentes de diferenciação a linhagem granulocítica e monocíticas, que foram favorecidas pelo AR e TPA, respesctivamente. Essa capacidade de diferenciação em duas vias foi característica de células de leucemia M3. O presente trabalho mostrou a utilidade de se usar diferentes indutores e testes funcionais (juntamente com a morfologia e a citoquímica), com a finalidade de elucidar a natureza das células leucêmicas

ABSTRACT

The effect of TPA (12-0-tetradecanoilpgorbol-13-acetate) and RA (retinoic acid) was tested on the cell lines HL-60 (acute promyelocytic leukaemia), K562 (erythroleukaemia) and cells from patients with several kinds of leukaemia (11 cases of acute lymphocytic leukaemis ALL, 2 chronic lymphocytic leukaemia-CLL and 19 acute myeloid leukaemia-M1 to M7). Esposure to TPA induced different changes in the leukaemia cells studied. In all cases examined, cells from patients with proven myeloid leukaemia became adherent to the substrate, while lymphoid leukaemia cells remained in suspension allowing to distinguish lymphoid from myeloid blast. The only exception was one case of with cells that became adherent and showed characteristics of hairy cell leukaemia. Furthermore, increased phagocytosis following TPA exposure permitted not only to distinguish myelois from lymphoid, as most myeloid cells were phagocytic, but also to characterize M7 as this was only myeloid leukaemia negative for phagocytosis. Further discrimination between the subtypes of myeloid leukaemia could be obtained through increased lysozyme production after TPA; M4 and M5 being the only ones to show an increase. All the myeloid cells studied had an increase of esterase positive cells after TPA with the exception of M1 cells that were negative before and remained as such after treatment. On the other hand, in agreement with the results of other authors, it was demonstrated that TPA and RA can lead to two independent ways of differentiation. Granulocytic-like lineag and monocytic-like cells being favoures by RA and TPA respectively. This capacity to differentiate into two pathways was a characteristic of M3 cells. The present results showed the usefulness of using differentiation inducers and functional tests toghether with morphology and cytochemistry to elucidate the nature of leukaemic cells