Aislamiento del ácido desoxirribonucléico transformante de Haemopphilus influenzae por lisis con mertiolato / Isolation of desoxiribonucleic acid from Haemophilus influenzae lysed with merthiolato

RESUMEN

El espectro de absorción de una solución con mertiolato y ácido desoxirribonucleico transformante de Haemophilus influenzae, fue igual al que se obtuvo al sumar sus dos espectros independientes. Después de dializar el mertiolato, el DNA mostró su espectro de absorción típico y su actividad transformantes fue igual al DNA testigo dializado que no había estado en presencia del mertiolato. Se describe un método nuevo para aislar el DNA transformante de H. influenzae que requirió 1) lisis bacteriana con mertiolato, 2) despretinización con cloroformo octanol, 3) preciptación del DNA con etanol frío, 4) eliminación del RNA por hidrólisis con ribonucleasa pancreática; 5) diálise y 6) conservación a - 70-C. el DNA transformante obtenido y purificado, después de la lisis con mertiolato de H. influenzae, tuvo un espectro de absorción típico con una lambda max entre 255 y 260 nm y una lambda min entre 230 y 235 nm. Los valores de E (P) a 260 y 230 nm fueron típicos de DNA nativo. La igualdad en la concentración de DNA determinada por el método espectrofotométrico o por su contenido en desorribosa, indicó la ausencia de cantidades significativas de RNA. La relación de absorbancia de 260 sobre 230 nm tuvo un valor alrededor de 2.2, sugiriendo que no había una concentración apreciable de proteínas. El DNA mostró una actividad transformante específica típica del ácido desoxirribonucleico transformante de H. influenzae