Cloning of A Bacillus thuringiensis crystal protein gene

RESUMO

Um fragmento de DNA contendo o gene da -endotoxina de um novo isolado de Bacillus thuringiensis, o SPL407 (serotipo H1), foi clonado usando o vetor pUC18 e um novo vetor, o pHT3101, que contém a regiäo de origem de replicaçäo de um plasmídeo nativo de B. thuringiensis. As clonagens foram feitas a partir do DNA total na primeira um fragmento de DNA de 12 kb Bam HI/Pst, foi clonado em E. coli usando o pUC18 como vetor, na segunda um fragmento de DNA de 12kb Smal/Pst foi clonado no pHT3101 digerido por Smal/Pst; e na terceira um fragmento de DNA de 7 kb Hpa/Smal foi inserido no pHT3101 digerido no Smal. Os plasmídios construídos usando o pHT3101 foram introduzidos em E. coli e em B. thuringiensis. A análise dos plasmídios dos clones recombinantes de B. thuringiensis indicou que eles näo sofreram rearranjos moleculares e parecem ser estruturalmente estáveis