Use of two multiplex (PCR) reactions as an initial delection screening method for DMD and BMD patients

RESUMO

O gene da distrofina, localizado em Xp21, é um loco gênico enorme, ocupando uma regiäo de mais de 2,3 Mb. Mutaçöes neste gene resultam na distrofia muscular Duchenne (DMD) ou distrofia muscular Becker (DMB). Cerca de 60% das mutaçöes säo deleçöes com um tamanho médio de 200 kb e säo detectáveis por análise de Southern blot usando sondas cDNA. Em 1988 Chamberlain et al. descreveram uma reaçäo multiplex para uma amplificaçäo simultânea de 9 exons do gene da distrofina, o que permitiu detectar cerca de 80% de todas as deleçöes. Recentemente Beggs et al. descreveram um conjunto adicional de primers para um teste multiplex de mais 9 exons. Usamos no Rio de Janeiro ambas as reaçöes multiplex no estudo de 27 pacientes DMD e 4 DMB. A síntese dos primers e o preparo dos kits foram realizados em Leiden. Com a reaçäo multiplex de Vhamberlain detectamos 10 deleçöes. A segunda reaçäo multiplex (Beggs) confirmou 7 dessas deleçöes e detectou mais 2 pacientes com deleçöes, uma para o exon 50 e outra para o exon 52. A análise Southern blot e a hibridizaçäo cDNA foram usadas para confirmar as deleçöes e determinar-lhes a extensäo. As sondas cDNA confirmaram as 12 deleçöes detectadas usando as duas reaçöes multiplex. Nossa experiência é a de que a abordagem multiplex para triagem inicial de deleçöes é um método bom e confiável