Nova tecnica de isoeletrofocalizaçao para a hexose 1-fosfato uridiltransferase / A new technique of isoelectrofocusing for the hexose 1-phosphate uridyltransferase

RESUMO

A deficiencia da enzima hexose 1-fosfato uridiltransferase (GALT) provoca a doença, transmitida por caracter autossomico recessivo, conhecida como galactosemia congenita. O padrao isoeletroforetico da GALT foi estudado em eritrocitos (normais e variante Duarte), leucocitos, fibroblastos de pele em cultura, figado e celulas HEPG2 em cultura, usando mini-gel de poliacrilamida, atraves do Phast System Pharmacia. Os extratos enzimaticos foram preparados em uma soluçao de ditiotreitol a 8mM e concentrados apos centrifugaçao no Minicon A25. A separaçao isoeletroforetica foi feita em 2000V,510Vh e 15 graus Centigrado durante 30 minutos. Apos a separaçao foi feita uma coloraçao especifica para a enzima utilizando um corante de tetrazolio. Os resultados obtidos indicam que a heterogeneidade da GALT pode ser facilmente demonstrada por esta tecnica, que e tambem precisa para o diagnostico dos variantes da GALT.