Purificacao e caracterizacao da miosina (EC 3.6.1.3) de pulmao bovino / Purification and characterization of the myosin (EC 3.6.1.3) of bovine lung

RESUMO

A miosina de pulmao bovino foi extraida e purificada atraves de algumas modificacoes no metodo proposto por Murakami e Col. (Murakami, U. et al 1974) que inclui a) Lavagem do tecido muscular; b) Extracao da miosina com solucao tampao contendo 0,3 KCl; c) Precipitacao da miosina por dialise; d) Dissolucao e dissociacao da miosina de actina em solucao tampao contendo 0,5M KCl, ATP e ions Mg2+; e) Ultracentrifugacao 110.000g/2-3 horas e f)Fracionamento com sulfato de amonio 45-55 por cento de saturacao. Com este procedimento a miosina foi purificada de 11,33 e 2,23 vezes, respectivamente, calculados com as atividades Ca2+ e K+, EDTA-ATPase. A miosina de pulmao bovino e composta de pelo menos tres tipos distintos de cadeias polipepitidicas, cujos pesos moleculares, estimados por eletroforese de gel de poliacrilamida 7,5 por cento (SDS-PAGE) foi 200.000, 19.000 e 16.000 daltons. A estrutura dessa molecula e classificada como do tipo II de acordo com a classificacao de Cheney & Mooseker. O perfil de aminoacidos foi, tambem avaliado mostrando composicao semelhantes a miosina de outras fontes. Avaliou-se o efeito da temperatura, pH, concentracao de KCl e ureia na atividade Ca2+ e K+-EDTA-ATPase. A miosina de pulmao bovino mostrou fenomeno bifasico na determinacao da energia de ativacao na presenca de Ca2+. O valor de Km para atividade Ca2+ ATPase foi determinado