Importancia diagnóstica de fracciones antigénicas de fasciola hepática separadas por cromatografía de exclusión por tamaño molecular y analizadas mediante inmunoelectrotransferencia en condiciones nativa y de denaturación-reducción / Diagnostic importance of fasciola hepatica antigenic fractions separated by molecular sieving chromatography and analyzed by immune electrotransfer blot under native and denatured-reduction conditions

RESUMEN

Mediante cromatografía de exclusión por tamaño molecular, se analizaron los antígenos de excreción-secreción (E-S) y somáticos (S) de fasciola hepática con el fin de caracterizar y comparar mediante electroforesis en condición nativa (PAGE) y de denaturación-reducción (SDS-PAGE) y posterior inmuno electrotransferencia (IET), las fracciones de importancia diagnóstica. Se emplearon sueros de ovinos en la etapa prepatente y patente de la infección con F. hepática,, así como de ovinos sanos y con otras parasitosis, provenientes de la XII Región (libre de la infección). Del análisis cromatográfico de los antígenos E-S y S se obtuvieron cinco peaks, identificándose en los eluidos del cuarto, una fracción de una M estimada de 30 kDa, según el análisis mediante PAGE e IET. Ella demostró ser de relevancia diagnóstica ya que fue reconocida sólo por los sueros de los ovinos infectados, tanto en la etapa prepatente como patente de la infección. En forma similar, la respectiva SDS-PAGE de los mismos eluídos de los antígenos E-S, permitió detectar una banda de reconocimiento de M aproximada a 30 kDa y otra menor a 14 kDa. En el caso de las fracciones S, además de observar estas dos bandas, se identificó otra de alrededor de 22 kDa. La IET respectiva, logró determinar posteriormente, que todas estas fracciones fueron importantes desde el punto de vista diagnóstico, ya que sólo fueron reconocidas por los sueros de los ovinos infectados, independiente de la etapa de la infección. Como no hubo diferencias en el reconocimiento de los anticuerpos de los animales con distomatosis, en condiciones de denaturación-reducción y nativa, se podría concluir que los epitopos que participan en los complejos antígeno-anticuerpo serían predominantemente de tipo secuencial (no conformacional), ya que al ser tratados con SDS y 2-ME no fueron funcionalmente alterados