Detection and identification of dengue virus isolates from Brazil by a simplified reverse transcription: polymerase chain reaction (RT-PCR) method

RESUMO

Apresentamos neste trabalho uma tecnica simplificada de RT-PCR para identificacao de virus de dengue. Cinco estirpes brasileiras de virus de dengue dos tipos 1 e 2, isoladas de pacientes e o virus da vacina de febre amarela como controle negativo, foram utilizadas nos testes. Celulas C6/36 foram infectadas e os fluidos de cultura coletados apos 7 dias. A RT-PCR, era efetuada em um unico tubo contendo 1 ul de fluidos infectados e diluidos 1/10 em agua destilada ou em mistura detergente contendo Nonidet P40. A mistura de reacao, num volume de 50 ul, continha 50 pmol de primers especificos, que amplificam sequencia com 482 pares de bases para virus do dengue tipo 1 e 210 pares de bases para dengue tipo 2, ou, ainda, primers para grupo dengue que amplificam sequencia com 511 pares de bases...