Desenvolvimento de um ensaio imunofluorométrico para a dosagem de prolactina sérica e identificaçäo das isoformas circulantes / Development of a fluoroimmunoassay for the seric prolactin dosage and identification of circulatory isoforms

RESUMO

A prolactina é um peptídeo linear que na sua forma principal tem 199 aminoácidos e peso molecular de 23 kDa. Diversas isoformas circulantes foram descritas, sendo as mais significativas as de alto peso molecular ("big-big"), e as formas glicosiladas. Com o intúito de produzir anticorpos monoclonais visando o desenvolvimento de um ensaio imunométrico contra prolactina, imunizamos camundongos com prolactina humana de origem hipofisária. Os dois animais com melhores títulos foram sacrificados e os esplenócitos utilizados em duas fusöes independentes. Dez linhagens estáveis foram produzidas, sendo que duas (A12P10 e A12P3) foram empregadas no desenvolvimento de um ensaio imunofluorométrico. O ensaio apresenta uma sensibilidade de 0,4 ng/mL e o perfil de imprecisäo mostra erro inferior a 10 por cento entre 0,8 e 120 ng/mL. Os resultados obtidos com este ensaio em 384 amostras de rotina foram comparados com os obtidos com um ensaio comercial de referência (Wallac), obtendo-se uma correlaçäo de r=0,91. Soros de pacientes com prolactinoma foram cromatografados em colunas de Sephacryl S-200 e Concanavalina A Sepharose com o intúito de separar as formas de also peso molecular e as formas glicosiladas. A determinaçäo dos níveis de prolactina no eluato dessas colunas mostrou que o novo ensaio reconhece as principais isoformas circulantes de prolactina.