Enzima inativadora de bradicinina liberada de fígado preservado ex-vivo / Bradykinin-inactivating enzyme is released from the ex-vivo stored liver

RESUMO

Objetivo - Ofígado inativa quantidades consideráveis de bradicinina; a principal enzima hepática cinino-inativadora (BIE, bradykinin inativating endopeptidase) hidrolisa especificamente a ligaçao Phe-Ser do nonapeptídio e foi caracterizada como sendo a oligoendopeptidase EC 3.4. 24.15. No transplante ortotópico de fígado existe correlaçao entre aumento da concentraçao de aminoácidos no líquido de preservaçao (conseqUência de proteólise) e falência do enxerto. O objetivo deste trabalho é verificar se ocorre liberaçao da BIE de fígados preservados ex-vivo no líquido Braun-Collins ou em soluçao de Krebs-Henseleit bicarbonato (Krebs). Método. Fígado de ratos Wistar (180-220g) foram exsangüinados e a pós remoçao foram preservados em líquido Braun Collins ou em soluçao Krebs, a 4 graus Celsius. Foram retiradas alíquotas do líquido de preservaçao nos tempos 0, 4, 8 e 24 horas, para dosagem de ALT, AST, DHL e BIE. A atividade fluorimétrica da BIE foi ensaiada com o substrato Abz-RPPGFSPFRQ-EDDnp (análogo sintético da bradicinina) e sua presença confirmada por immunoblotting, revelado com anticorpo específico anti-EC 3.4.24.15. Resultados. A liberaçao de ALT, AST, DHL e BIE é significativa no período 8-24 hs. Nas alíquotas de 24 hs, em relaçao ao tempo zero, a concentraçao das quatro enzimas aumentou, respectivamente, no líquido Braun Collins, 8, 7, 19 e 10 vezes e, na soluçao de Krebs, 21, 17, 27 e 21 vezes; a relaçao ALT/DHL foi sempre inferior a um. Conclusao. Ocorre liberaçao de BIE durante a preservaçao ex-vivo do fígado, o que poderá servir como indicaçao da condiçao de preservaçao do enxerto; diminuiçao da capacidade cinino-inativadora do fígado poderá afetar sua reatividade vascular.