Biogênese da fímbria AAF/II de Escherichia coli enteroagregativa / AAF/II fimbriae biogenesis in enteroaggregative Escherichia coli

RESUMO

Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) é um patógeno emergente, associado à doença diarreica, que apresenta como característica o padrao de adesao agregativa em células HEp-2. Vários fatores de virulência já foram descritos em amostras de EAEC, utilizando como modelo a amostra 042, comprovadamente virulenta para humanos. Dentre esses fatores estao as enterotoxinas PET e EAST1, além da fímbria denominada AAF/II. Todos esses fatores sao codificados pelo plasmídios de 65 MDa (pAA2). Embora seu papel na virulência tenha sido demonstrado, os determinantes genéticos da biogênese de AAF/II nao eram conhecidos. Para tanto, no presente trabalho foram realizados experimentos para caracterizaçao da regiao de pAA2 relacionada à biogènese de AAF/II. Através da análise das seqüências de nucleotídeos de uma regiao de 25 kb do plasmídio pAA2, foi demonstrado que a mesma alberga os, genes das enterotoxinas (pet e astA), flanqueados por duas regioes relacionadas com a biogênese de AAF/II (regiao l e 2), além do ativador de transcriçao (aggm relacionado à sua expressao. A organizaçao genética da biogenêse de AAF/II identificada na amostra 042 é única, uma vez que na família Dr de adesinas, da qual AAF/II é membro, esses genes estao organizados em um operon. Nessa organizaçao exclusiva, a regiao l apresenta o cluster "chaperonina-pilina-ativador de transcriçao" (aafD-aafA-aggR, enquanto a regiao 2, distante em 12 kb, apresenta o cluster "chaperonina nao funcional-usher-invasina". As duas regioes sao flanqueadas por Seqüências de Inserçao sugerindo que essa regiao seja um local em pAA2 de alta taxa de recombinaçao. A análise de homologias a nível de aminoácidos indicaram que a regiao l deriva do operon da fímbria AAF/I, enquanto a regiao 2 deriva do operon das adesinas AfaE de E. coli uropatogênicas. Os dados de ativaçao da transcriçao através da regulaçao por aggR também corroboram com essa hipótese, pois apenas os genes da regiao l sao fortemente regulados pelo mesmo, como ocorre em AAF/I. Através da mutagênese nao-polar, foi demonstrado que os genes essenciais para a expressao de AAF/II sao aafA, aafC, aafD e aggR, os quais correspondem à pilina, usher, chaperonina e ativador de transcriçao, respectivamente. Esse locus descrito em pAA2 deve um representar um importante set de determinantes de virulência em outras amostras de EAEC, uma vez que apresenta os potenciais fatores é até entao descritos na amostra 042. Além de AAF/II, a fimbria AAF/I está...(au)