Aspectos da transduçäo de sinal na invasäo elular de formas metacíclicas de Trypanosomacruzi / Signal transduction during the cell invasion by metaciclic forms of Trypanosoma cruzi

RESUMO

Neste estudo foi investigado o papel dos resíduos sialil da glicoproteína de 35/5OkDa das formas metacíclicas de T cruzi no processo de invasão das células de mamífero. Após o tratamento de formas metacíclicas da cepa G com neuraminidase bacteriana, o percentual de invasão foi superior ao observado nos controles não tratados. O tratamento enzimático aboliu a reatividade dos parasitas com o antícorpo 3C9 que reconhece epitopos contendo ácido siálico, em contrapartida, a reatividade com lOD8 foi preservada. Ressialilação de gp35/50, por incubação dos parasitas com transialidase e sialil lactose, restaurou a reatividade com o anticorpo 3C9 assim como com a lectina específica para ácido siálico. A capacidade de invasão dos parasitas ressialilados foi comparável aos controles antes da dessialilação, corroborando o conjunto de dados. Gp35/50 purificada, dessialilada pelo tratamento com neuraminidase, liga-se de forma mais efetiva à célula hospedeira quando comparado ao controle não tratado. Analisando os dados de mobilização de cálcio intracelular na célula hospedeira, as preparações de parasitas e mucina purificada dessialilados induzem elevação de cálcio significativamente maior que os controles não tratados, em concordância com os dados de invasão. Modificação dos índices de invasão ou na sinalização de cálcio não foram observados quando do tratamento de tripomastigotas metacíclicos da cepa CL, que apresenta uma mucina variante, aparentemente não implicada no processo de invasão. Também foi examinada neste trabalho a dinâmica de fosforilação de resíduos tirosina em T. cruzí requerida para o processo de invasão. Tripomastigotas metacíclicos e de cultivo de tecidos tratados com genisteína, um inibidor da atividade tirosina quinase, têm menor capacidade de invasão de células quando comparados aos controles não tratados. Um fator solúvel contido no extrato de células HeLa e ausente no extrato de células K562, as quais são resitentes à invasäo por T cruzi, promove a fosforilação de uma proteína de 175kDa (pl75) em tripomastigotas. Pl75 mostrou-se sensível à genisteína e ausente em formas epimastigotas. A atividade indutora de fosforilação foi abolida pela prévia adsorção com extrato de formas metacíclicas ou com Jl8, a proteína recombinante que contém a sequência completa de gp82, uma glicoproteína especifica de formas metacíclicas implicada no processo de invasão celular. O mesmo ...(au)