Avanços na caracterizaçäo biológica da protease trombica Lachesis muta muta / Advances of biological characterization of trombic proteae Lachesis muta muta

RESUMO

1) Quanto ao efeito de cátions mono e bivalentes na atividade amidásica da PTLmm sobre BZ-L-Arg-pNA, concluímos que a enzima em estudo é ativada significativamente pelo sódio (Na+) e inibida fortemente pelo cádmio (cd2+). 2) Quanto aos estudos cinéticos da PTLmm frente à vários substratos fluorogênicos, que mimetizam o sítio de clivagem da trombina na cadeia (x e P do fibrogênio, no fator XIII, na protrombina; concluímos que a PTLmm apresentou maior especificidade pelos substratos que mimetizou a cadeia a do fibrogênio, sendo que a medida que aumentamos o tamanho do substrato, aumentou de modo direto a especificidade da enzima pelo substrato. A PTLmm não hidrolisou o substrato de protrombina. 3) Quanto aos estudos cinéticos da PTLmm frente aos substratos fluorogênicos que mimetizam o sítio de clivagem da calicreína plasmática humana no cininogênio de alto peso molecular; concluímos que a PTLmm hidrolisou com eficiência somente o substrato que mimetiza a seqüência carbóxi-terminal do cininogênio, não hidrolisou o substrato que mimetiza a seqüência N-terminal do cininogênio e nem o substrato maior que mimetiza a seqüência LeU373 _ lle 393 do cininogênio humano. Pelas experiências com substratos sintéticos justificamos o fato da PTLmm não ter atividade cinina liberadora. 4) Os diferentes substratos fluorogênicos com ligações Arg-X, potencialmente cliváveis pela PTLmm, não sofreram hidrólise pela enzima, confirmando a natureza específica da enzima pela cadeia a do fibrinogênio e pelos substratos que a mimetizam. 5) A PTLmm hidrolisou o substrato do receptor plaquetário de trombina de modo diferente da trombina, a trombina quebra somente a ligação Arg@ser desencadeando o processo de agregação, a PTLmm quebra in vitro a ligação Arg@ser e outra ligação Arg@Asn. 6) A PTLmm não hidrolisou a cadeia P da insulina (substrato natural) que contém ligação Arg-Gly, confirmando sua especificidade natural para quebra de ligação Arg-Giy na cadeia a do fibrinogênio. 7) A curva de pH x atividade da PTLmm nos permitiu fixar a faixa de pH entre 8 e 9 com o pH adequado para maximizar a atividade da PTLmm sobre substratos fluorogênicos. 8) O estudo in vitro com fatores de coagulação, nos permitiu concluir que a PTLmm tem atividade dirígida para...(au)