Clonagem do operon de resistência ao íon mercúrio do plasmidio pBH100 em escherichia coli 5K, usando o vetor pAT 153 / Cloning of the mercuric ion-resistance operon of pBH100 into escherichia coli 5K using pAT153 as vector

RESUMO

Resumo Inicialmente, o plasmidio pBH100 (95 Kb) que codifica resistência, canamicina, cloranfenicol, estreptomicina e mercúrio inorgânico, foi transferido, por conjugaçäo, da linhagem selvagem Escherichia coli BH100 para a receptora. E. coli 5K. Para clonar o operon Hg plasmideos recombinantes foram construidos in vitro a partira ligaçäo (ligase) de fragmentos de pBH100, contendo os marcadores de resistência ao mercúrio, com o veiculo de clonagem pAT153, ambos digeridos coma endonuclease BamH I. Após transformaçäo de Escherihia coli 5K análises genéticas e eletroforética permitiram a detecçäo dos plasmídios recombinantes pATHg 1, pATHg2, pATHg3. Análise de restriçäo do plasmídio pATHg1, digerido com BamHI e Hind III, evidenciou três bandas de 24, 4 e 1 Kb e duas bandas de 21 e 8 Kb, respectivamente. O pATHg3 apresentou menor tamanho (12 Kb) e menor estabilidade 37 (por cento)(au)