Ativaçäo celular induzida pela glicolipoproteína (GLP) de leptospira interrogans em células mononucleares do sangue periférico humano / Human peripheral blood mononuclear cells activations induced by leptospira interrogans glycolypoprotein (GLP)

RESUMO

A leptospirose grave é uma doença caracterizada por quadro séptico e disfunções orgânicas resultantes da interação do hospedeiro com a bactéria Leptospira interrogans. A leptospirose cursa com vasculite generalizada decorrente de fenômenos tóxicos. A glicolipoproteína (GLP) é uma toxina isolada de Leptospiras que bloqueia a bomba de sódio (Na, K-ATPase) nos rins e leva a disfunção renal. O objetivo deste estudo é verificar se a GLP é capaz de induzir ativação celular através da mensuração da secreção de Fator de Necrose Tumoral Alfa (TNF-a) e interleucina-10 (IL-10) em células mononucleares do sangue periférico (CMSP) e de induzir a expressão de antígenos de ativação celular CD69 em linfócitos T e monócitos e HLA-DR em monócitos. A GLP foi extraída de L. interrogans serovar copenhageni patogênica e L. biflexa serovar patoc não patogênica (GLPp). CMSP obtidas de doadores sadios foram separadas por gradiente de Ficollpaque e cultivadas em RPMI 1600 foram estimuladas com GLP e as citocinas foram dosadas por ensaio imunoenzimático no sobrenadante das culturas. O lipopolissacáride (LPS) de Salmonella abortus equii foi usado como controle positivo. Sangue total de voluntários sadios foi estimulado com LPS, GLP e GLPP e a expressão de CD69 e HLA-DR foi mensurada por citometria de fluxo. A ligação de LPS conjugado com biotina (LPSB) a monócitos, na presença de GLP e LPS foi medida por citometria de fluxo. A GLP, com seis horas de incubação e nas doses de O,3mg/ml, O,O3mg/ml e O,OO3mg/ml, induziu a secreção de 5400,85 ñ 1300,32 pg/ml (média ñ desvio- padrão); 3037,04 ñ 547,09 pg/ml e 815,85 ñ 588,05 pg/ml de TNF-a, respectivamente. Estes níveis, após 72 horas de incubação, caíram progressivamente até 1391,47 ñ 89,90; 658,35 ñ 534,53 e 114,89 ñ 199,00 pg/ml, respectivamente. A GLP, nas mesmas doses, produziu 606,26 ñ 690,92; 395,34 ñ 411,56 e 70,91 ñ 15,66 pg/ml de IL-10 com seis horas de incubação. Com 24 a 48 horas atingiu o pico e manteve-se elevada por até 72 horas, com níveis de 1564,79 ñ 622,39, 821,83 ñ 76,05 e 272,26 ñ 182,68 pg/ml, nas doses respectivas, após 48 horas de incubação. A expressão de CD69 em linfócitos T CD3+/CD8+ aumentou de 2,76 ñ 1,07 para 18,91 ñ 8,54 por cento. Em linfócitos T CD3+/CD8- aumentou de 1,16 ñ O,89 para 12,67 ñ 4,48 por cento e em monócitos (CDl4+) aumentou de O,11 ñ O,12 para 15,23 ñ 3,42 por cento. A expressão de HLA-DR em monócitos aumentou de 224,19 ñ 104,55 para 767,73 ñ 126,40...(au)