Photoaffinity labeling of extracellular and intracellular androgen binding proteins

RESUMEN

Se describe un método de marcación por fotoafinidad de la SHBG sérica humana y de conejo en un precipitado de sulfato de amonio utilizando delta6-testosterona 3H como ligando. La precipitación disminuye la contaminación con albúmina y concentra al mismo tiempo la globulina ligadora de hormonas sexuales. La marcación por fotoafinidad se realizó mediante un flash electrónico. El esteroide libre y el no unido covalentemente se adsorbieron mediante un tratamiento prolongado con una solución de carbón dextrán. La cromatografía en columna de Sephadex G-200 mostró un único pico radioactivo unido covalentemente con el volumen de elución de la SHBG. Este preparado es útil para ser utilizado en estudios de metabolización de la SHBG in vivo. Con algunas modificaciones, el método fue aplicado a la marcación por fotoafinidad del receptor citosólico de andrógenos de próstata utilizando al R 1881 como ligando. El receptor de andrógenos de citosol de próstata también fue precipitado con sulfato de amonio. Luego de marca, irradiar y calentar a 50- C el R 1881-3H no unido covalentemente fue removido mediante el tratamiento con carbón dextrán. En presencia de fotólisis previa al tratamiento con calor, la cromatografía en microcolumnas de Sephadex G-25 mostró un pico radiactivo que eluyó con el volumen de elución de las macromoléculas, el cual desaparecía en las muestras no fotolizadas previamente; sin embargo el receptor fotomarcado tuvo un coeficiente de sedimentación, luego de ultracentrifugación en gradientes lineares de sucrosa, diferente del receptor no irradiado, sugiriendo que la fotólisis generó a algún cambio en la configuración del complejo