Construção e caracterização de mini-bibliotecas de EST geradas com RT-PCR de baixa estringencia e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoni / Construction and characterization of EST minilibraries generated with low stringency RT-PCR and cloning of apyrase of Schistosoma mansoni

RESUMO

Este trabalho demonstrou a construção de minibibliotecas de "Expressed Sequence Tags" (EST) com o uso de RT-PCR de baixa estringencia e "primer" consenso-degenerado. Através do estudo de parâmetros críticos como concentração de sais, temperatura e velocidade de ciclagem, composição dos "primers" e qualidade do RNA mensageiro, foi possível padronizar um protocolo. Tal protocolo permitiu um aumento do número de seqüências por minibibliotecas em relação a protocolos similares existentes na literatura (Dias Neto et al., 1997 e 2000) sem perda de características desejáveis como amplificação preferencial do centro dos genes e normalização das mensagens...