Vacinação genética na infecção experimental pelo Trypanosoma cruzi utilizando genes expressos em diferentes estágios do desenvolvimento do parasita / Genetic vaccination during experimental infection with Trypanosoma cruzi using genes expressed in different developmental stages of the parasite

RESUMO

A imunização de I camundongos, com plasmídios contendo genes de Trypanosoma cruzi induziu anticorpos específicos, células T CD4+ Thl, CD8+ Tcl e imunidade protetora contra infecção. Até o momento em que iniciamos este trabalho os plasmídios utilizados para vacinação com DNA continham genes codificando antígenos expressos por tripomastigotas, as formas não replicativas do parasita. No presente estudo exploramos a possibilidade de utilizar genes expressos, por amastigotas, as formas do parasita que se replicam dentro das células do hospedeiro, para vacinação experimental com DNA. Com este fim, selecionamos para nosso estudo um gene relacionado à proteína-2 de superficie de amastigotas (ASP-2), um antígeno reconhecido por anticorpos e células T de camundongos e indivíduos infectados utilizando oligonucleotídeos específicos para o gene asp-2, quatro grupos distintos de genes foram amplificados a partir do cDNA de formas amastigotas da cepa Y de T. cruzi. Ao nível de nucleotídeos, eles compartilharam 82,3 a 89,9 por cento de identidade com o gene asp-2 descrito previamente. Um gene denominado clone 9 apresentou o maior grau de identidade com o gene asp-2 e foi selecionado para estudos imunológicos. Anti-soro policlonal gerado contra a porção C-terminal da proteína recombinante expressa pelo gene clone 9 reagiu comi um, antígeno i de aproximadamente 83 kDa expresso nas formas amastigotas de T cruzi. A imunização de camundongos BALB/c com plasmídios de expressão em células eucarióticas contendo o gene clone 9 induziu anticorpos específicos e a secreção de IFN- dependente de células T CD4+. Quando desafiados com formas tripomastigotas, os camundongos imunizados com os plasmídios contendo o gene clone 9 exibiram parasitemias reduzidas e sobreviveram à infecção letal, Subseqüentemente, testamos a hipótese de que talvez pudéssemos incrementar a, imunidade protetora contra a infecção experimental pela indução simultânea de uma resposta imune contra antígenos expressos nas formas amastigotas e tripomastigotas do T cruzi, Com este intuito, camundongos altamente suscetíveis A/Sn foram imunizados com plasmídios contendo o gene clone 9 ou o gene da trans-sialidase...