Análise comparativa da sinalização celular mediada por receptores AT1 da angiotensina II em células ovarianas de hamster chinês e em células de músculo liso da aorta de coelho / Comparative analysis of cell signaling mediated by angiotensin II AT1 receptors in chinese hamster ovary cells and aortic smooth muscle cells

RESUMO

Objetivos: Testou-se a hipótese de que as regiões não codificadoras do gene do receptor AT, da angiotensina II mediaria a função do receptor AT, afetando o mecanismo de taquifilaxia. Investigou-se também o efeito da Ali, extracelular e intracelularmente administrada, sobre a redistribuição dos íons Na+, Ca 2+ e produção de mensageiros secundários em células de músculo liso da aorta de coelho em cultura primária e transformadas espontaneamente e em células de ovário de hamster chinês transfectadas com o receptor ATA (CHO-AT,). Métodos: Transfecção das células, inicialmente, com o cDNA contendo somente a região codificadora do gene, e posteriormente com diferentes extensões das regiões 3' e 5' não codificadoras. Foram utilizadas células CHO, que não contém o receptor AT, em contraste com as células do músculo liso que expressam endogenamente . Fez-se também, a co-transfecção do cDNA do trocador Na+/Ca2+ em células CHO-ATi, para estudos comparativos com as células de músculo liso que o possuem de forma endógena. Enfocou-se também, o papel das organelas como o núcleo, a mitocôndria e o retículo endoplasmático/sarcoplasmático na sinalização de Ca 2+ por ação da Ali. Os estudos foram realizados apoiados nas técnicas de imunocitoquímica, biologia molecular, dosagens bioquímicas, microfluorimetria, microinjeção, microscopia de fluorescência confocal e de alta resolução. Conclusões: O receptor AT, recombinante, contendo a região 3' não codificadora, preveniu a taquifilaxia para a captação de Ca 2' em resposta a Lys2All, sugerindo que esta região estaria envolvida neste fenômeno. A análise das imagens de fluorescência obtidas de íons Na+ e Ca2+, mostrou que a presença do trocador Na+/Ca2+ influiu na distribuição das concentrações intracelulares de Na' e Ca 2+nas células CHO-ATi. A resposta ao Ca 2' bem como as oscilações de Ca 21 induzidas nessas células pela ação da Ali mostraram alta dependência ao Ca 2+ extracelular enquanto nas células do músculo liso, somente as oscilações de Ca 2+ foram dependentes do Ca 2+ extracelular. A observação de que a Ali microinjetada no núcleo induziu aumentos na concentração do Ca 2+ indicou que os receptores para a Ali presentes no núcleo foram ativados e produziram IP3, responsável pelo aumento no Ca 2+ nuclear...