PCR and bioassays screening of Bacillus thuringiensis isolates from rice-fields of Rio Grande do Sul, specific to lepidopterans and coleopterans

RESUMO

Visando a selecão de seis grupos de genes cry de Bacillus thuringiensis (Bt), que codificam proteínas ativas para coleópteros e lepidópteros pragas do arroz, 46 isolados de Bt provenientes de amostras de solos das regiões orizícolas do Rio Grande do Sul (RS), foram testados por PCR. Os isolados de Bt foram crescidos em Agar Nutriente durante 12 h e submetidos a extracão de DNA total. Os fragmentos amplificados foram analisados em géis de agarose (1-1,5 per center). Os resultados referentes ao total de isolados selecionados mostraram que 56,51 per center foram potencialmente específicos a lepidópteros (cry1, cry2 e cry9) e 21,73 per center a coleópteros (cry3 e cry7/8), tendo sua distribuicão homogênea entre as regiões orizícolas do RS. Apenas os genes cry2 foram localizados somente na região Litoral. Nos bioensaios com lagartas de Spodoptera frugiperda o isolado Bt 2027-1 obteve a maior mortalidade corrigida (25 per center), o qual havia sido pré-selecionado pela presenca de genes cry9. Para a mesma espécie, os testes de toxicidade através de proteínas purificadas de Bt aizawai HD68 revelaram uma DL50 de 0,95 mg/larva. Dois isolados de Bt causaram 100 per center de mortalidade às larvas de Oryzophagus oryzae, tendo esses sido pré-selecionados pela presenca de genes cry3. Os resultados dos bioensaios confirmam a predicão da atividade de Bt por PCR, a qual deve estar diretamente relacionada aos genes cry que codificam as proteínas inseticidas específicas.