Desempeño de los sistemas Cholera-SMART® y Pathogen-Detection-Kit® en el diagnóstico rápido del cólera / Performance of Cholera-SMART® and Pathogen Detection-Kit® in the quick diagnosis of cholera

RESUMEN

Objetivos. Comparar el desempeño de dos sistemas rápidos de diagnóstico de cólera con el método de cultivo y proponer una estrategia que permita mejorar la especificidad y la sensibilidad de estos sistemas y disminuir los costos del diagnóstico. Métodos. En el estudio participaron el Centro Nacional de Referencia en Bacteriología (CNRB) del Instituto Costarricense de Investigación y Enseñanza en Nutrición y Salud (INCIENSA) y hospitales de las provincias de Alajuela, Guanacaste y San José, en Costa Rica. Se emplearon 237 muestras de heces para evaluar el desempeño de dos pruebas rápidas para el diagnóstico de Vibrio cholerae O1 Pathogen Detection Kit® (PDK, Intelligent Monitoring Systems, Gainsville, Florida, EUA) y Cholera-SMART® (New Horizons Diagnostics Corp., Columbia, Maryland, EUA), tanto en forma directa (SMART directo y PDK directo) como a partir de cultivos de enriquecimiento de 6 horas (SMART-6 y PDK-6) y de 18 horas (SMART18 y PDK-18) a 37 °C en agua de peptona alcalina. Las muestras diarreicas y semiformadas se cultivaron y se evaluaron con las pruebas rápidas directas; cuando el resultado inicial era negativo se repitieron a las 6 y 18 horas de cultivo. Los hisopados rectales y fecales se evaluaron a partir de cultivos de enriquecimiento de 6 y de 18 horas. Adicionalmente se estudió la sensibilidad analítica de los sistemas rápidos con cultivos puros de 18 a 24 horas de incubación de V. cholerae O1 (cepa SOS-833, CNRB, Costa Rica) y se evaluó la utilidad del análisis microscópico de la motilidad para racionalizar el uso de las técnicas rápidas. Resultados. La sensibilidad, tanto de SMART directo como de PDK directo, fue de 100% en muestras de heces diarreicas y semiformadas y en contenido intestinal de cadáveres. Con estas muestras, el procedimiento SMART directo mostró una especificidad de 100%, mientras que con el PDK directo esta fue de 85,7% a 77,4%, en dependencia del tipo de muestra. Los resultados positivos falsos obtenidos mediante PDK directo resultaron negativos con PDK-6 y PDK-18. Entre los hisopados rectales y fecales de personas con y sin diarrea o que recibieron tratamiento previo con antibióticos se observaron tres resultados negativos falsos con SMART-6 y dos con PDK-6, los cuales resultaron positivos mediante SMART-18 y PDK-18, respectivamente. Ambos sistemas mostraron una concordancia excelente (índice kappa superior a 0,9) en las diferentes modalidades evaluadas. La sensibilidad analítica de ambos sistemas fue de 6 107 ufc/mL de V. cholerae O1, lo que concordó con la observación microscópica de 10 microorganismos o más con motilidad típica de vibriones por campo (aumento de 1000). Las muestras con menos de 10 microorganismos con motilidad típica de vibriones tenían concentraciones entre 6 103 y 6 106 ufc/mL y solo resultaron positivas después de un enriquecimiento de 6­18 horas. Se propone una estrategia para establecer la presencia de Vibrio cholerae O1 en un tiempo inferior al de los métodos convencionales, con valores predictivos positivo y negativo de 100%. Conclusiones. Los sistemas SMART y PDK permiten llegar a un diagnóstico certero de cólera en poco tiempo, no requieren de instrumental complejo ni de personal técnico altamente calificado y funcionan satisfactoriamente en condiciones de campo. Mediante la estrategia propuesta se pueden aumentar la especificidad y la sensibilidad de estos sistemas y se reducen los costos del diagnóstico, lo que permite recomendar su empleo para la vigilancia del cólera en áreas con escasos recursos, donde esta enfermedad constituye un grave problema de salud pública

ABSTRACT

Objectives. To compare the performance of two rapid systems for the diagnosis of cholera with the culture method, and to propose a strategy for improving the specificity and sensitivity of these systems and reducing the costs involved in making a diagnosis. Methods. The following institutions participated in the study the National Bacteriology Referral Center (Centro Nacional de Referencia en Bacteriología, CNRB) of the Costa Rican Institute for Research and Teaching in Nutrition and Health (Instituto Costarricense de Investigación y Enseñanza en Nutrición y Salud, INCIENSA) and various hospitals in the provinces of Alajuela, Guanacaste and San José, in Costa Rica. A total of 237 feces samples were used to asses the performance of two tests for the rapid detection of Vibrio cholerae 01 the Pathogen Detection Kit© (PDK, Intelligent Monitoring Systems, Gainesville, Florida, USA) and Cholera-SMART© (New Horizons Diagnostics Corp., Columbia, Maryland, USA), both when applied directly (direct SMART and direct PDK) and when applied to specimens cultured in brothenriched medium for 6 hours (SMART-6 and CPK-6) and for 18 hours (SMART-18 and PDK-18) at 37 °C in alkaline peptone water. Liquid and partially formed stools were cultured and examined by means of the rapid direct test; when the initial result for periods of 6 and 18 hours. Rectal and fecal swabs were obtained from feces cultured in enriched-broth medium for 6 and 18 hours. In addition, we studied the sensitivity of the rapid testing systems by using pure cultures of V. cholerae 01 (strain SOS-833, CNRB, Costa Rica) that were incubated for 18 to 24 hours, and we assessed the usefulness of observing motility under the microscope in order to rationalize the use of rapid methods. Results. The sensitivity of the direct SMART test and of the direct PDK test was 100% when samples obtained from liquid and partially formed stools and from the intestinal contents of dead bodies were used. With these samples, the direct SMART procedure showed a specificity of 100%, whereas the direct PDK procedure showed a specificity that ranged from 85.7% to 77.4%, depending on the type of sample. False positives obtained with the direct PDK method turned out to be negative with PDK-6 and PDK-18. Among the rectal and fecal swabs of persons with and without diarrhea or who had received prior treatment with antibiotics, three results that were negative with the SMART-6 procedure and two that were negative with the PDK-6 procedure turned out to be positive with the SMART-18 and PDK-18 procedures, respectively. Both systems showed excellent concordance (kappa index above 0.9) throughout. Both systems were sensitive to 6 107 colony-forming units per milliliter (cfu/mL), which was concordant with the microscopic observation of 10 microorganisms or more per field with the type of motility that characterizes vibrios (at 1 000 magnification). Samples having fewer than 10 microorganisms with the motility that characterizes vibrios had concentrations between 6 103 and 6 106 cfu/mL and became positive only after incubation in enriched-broth medium for 6 to 18 hours. We propose a strategy for diagnosing the presence of V. cholerae 01 infection in less time than it takes with traditional methods, with positive and negative predictive values of 100%. Conclusions. The SMART and PDK systems make it possible to accurately diagnose cholera quickly, don't require sophisticated equipment or highly qualified technical personnel, and perform satisfactorily in field conditions. Through the proposed strategy, it becomes possible to improve the specificity and sensitivity of these systems and to reduce the cost of making a diagnosis, thus making them suitable for use in cholera surveillance in low-income settings where this disease is a serious public health problem: