Isolation and characterization of a newly isolated Pseudomonas mutant for protease production

RESUMO

Uma bactéria isolada do solo e identificada como Pseudomonas sp. RAJR 044 demonstrou ser uma potencial produtora de protéase extracelular. Um mutante JNGR 242 dessa espécie foi obtido mediante radiação ultravioleta sob condições experimentalmente otimizadas de pH 7,0, temperatura de 34ºC, volume de inóculo de 1,0 mL e tempo de incubação de 24 hora produziu 2,5 mais protease. Também foram realizadas análises comparativas das características química quanto assimilação de diferentes fontes de carbono e de nitrogênio. O crescimento máximo desse mutante na placa de ágar gelatina (2%) foi obtido na presença de sacarose (2%), maltose (2%), sulfato de amônia (2%) e nitrato de potássio (2%), ao passo que no caso da linhagem original a melhor fonte de carbono foi a sacarose (2%) e o nitrato de amônia (2%) como a melhor fonte de nitrogênio. As protéases purificadas de ambas as espécies (original e mutante) mostraram faixas homogêneas que correspondem ao peso molecular 14,4 kDa na SDS-PAGE. Ao se estudar as propriedades cinéticas de ambas as espécies, observou-se que a taxa de hidrólise da caseína era máxima em pH 7,0 e 8,0, , temperaturas de 45ºC e 60ºC para a espécie original e a mutante, respectivamente. Observou-se também que ambas as protéases extracelulares foram inibidas pela serina, isto é, PMSF à concentração de 2mM.