Detecção e caracterização molecular do vírus da hepatite A em amostras de saliva / Detection and molecular characterization of the hepatitis A virus in saliva samples

RESUMO

A infecção pelo vírus da hepatite A(HAV)é comum em creches e devido à característica de disseminação assintomática da doença entre crianças,pode gerar surtos principalmente em comunidades fechadas...Foram coletadas amostras pareadas de soro e saliva de 126 indivíduos envolvidos em um surto de hepatite A, ocorrido em outubro de 2004,em uma creche pública no Rio de Janeiro.Todas as amostras foram...da infecção.Para detecção do RNA do HAV em amostras de saliva foram avaliadas duas técnicasRT-nested-PCR e PCR em tempo real.Em ambas as técnicas vários parâmetros foram avaliadosdiferentes métodos de extração do RNA, eficiência de 2 transcriptases reversas e volumes variados de cDNA e Taq Pol.A técnica de RT-nested-PCR apresentou um limite mínimo de detecção de 6x10(ao cubo) cópias/mL,não foi observada a presença de inibidores e não houve relação entre a detecção do HAV na saliva e a presença de sangue nestas amostras.Foi observada uma predominância do RNA do HAV na saliva(50por cento)de pacientes agudos,em relação às amostras de soro(42por cento).Entre as amostras sem marcadores,3 foram positivas no soro e na saliva.A técnica de PCR em tempo real foi padronizada para detecção e quantificação do RNA viral nas amostras de saliva,apresentando sensibilidade de 140 cópias/mL e alta reprodutibilidade.Pela técnica de PCR em tempo real,o RNA do HAV foi detectado em 60por cento das amostras de saliva testadas,entre elas 32 eram anti-HAV IgM positivas e 17 anti-HAV IgM/total negativas.A carga viral média no soro foi de 2,8x10(ao cubo)cópias/mL,e na saliva foi de 1,7x10(ao cubo)cópias/mL,não houve diferença significativa entre estas médias,indicando que não houve associação entre a detecção do RNA do HAV em amostras de saliva e a carga viral no soro.As amostras de soro e de saliva HAV-RNA positivas foram seqüenciadas.As amostras seqüenciadas neste estudo foram todas classificadas como genótipo I.Entre as amostras de soro, 16 foram classificadas como subgenótipo IA e 7 como...