Epimastigogénesis de Trypanosoma cruzi en medio axénico: cambios peptídicos, glicopeptídicos y enzimáticos / Trypanosoma cruzi epimastigogenesis: peptidic, glicopeptidic and enzymatic changes

RESUMEN

La epimastigogénesis de Tripanosoma cruzi es la transformación tripomastigota-epimastigota que ocurre en el tracto intestinal del insecto vector (Hemiptera, Reduvidae). Aún cuando se ha estudiado este fenómeno in Vitro en el insecto, poco se sabe los cambios morfológicos y moleculares que ocurren durante este proceso. En este trabajo se analizaron los perfiles peptídicos, glicopeptídicos y proteolíticos durante la simulación de este evento in vitro en un medio axénico. Se empleó tripomastigotas sobrenadantes de células (EPm clon6) incubados a tiempos variables (1/2 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 días) en medio LITB a 27º C. Se realizó recuento diferencial de parásitos en cámara Neubauer y láminas coloreadas (Giemsa). Los perfiles peptídico y glicopeptídico se analizaron mediante SDS-PAGE y coloraciones específicas. Los perfiles proteolíticos se caracterizaron mediante zimografía usando gelatina como substrato e inhibidores específicos de cisteín- y metalo-proteasas. Nuestros resultados indicaron cambios morfológicos a partir de las 12 horas de incubación, con aparición de formas en diferenciación y amastigotas. A partir del sexto día se registró una caída en el porcentaje de amastigotas con un aumento concomitante de epimastigotas. Los cambios moleculares coincidieron con los cambios morfológicos, con aparición de péptidos y glicopéptidos característicos de epimastigotas a partir del octavo día. La actividad proteolítica es significativamente mayor el octavo día, incrementándose progresivamente hasta el día 12 de la cinética, siendo mayor en epimastigotas que en tripomastigotas; existe expresión diferencial de proteasas, con aumento significativo de la actividad de cisteín proteasas durante el evento, mientras que las metaloproteasas sólo se expresaron a partir del día 10. Estos resultados indican una activación diferencia de proreasas durante la epimastigogénesis y sugieren la participación de estas enzimas durante el proceso