Avaliação digital comparativa da expressão tecidual da proteína cerbB-2 em mulheres portadoras de doenças tumorais da mama / Comparative digital evaluation of tissue expression of the cerbB-2 protein in women with breast tumoral diseases

RESUMO

A imuno-histoquímica (IHC) para expressão da proteína Her-2/neu tornou-se um dos mais atrativos testes de rotina, devido a custo, conveniência e relevância biológica. Contudo, têm sido relatados problemas quanto à variabilidade das marcações em IHC, além da subjetividade na interpretação dos métodos de IHC convencionais. Assim, o presente estudo objetiva quantificar morfometricamente a imunomarcação da proteína cerbB-2 expressa em tumores de mama. Fragmentos de tecido mamário normal (n = 10) e com doença tumoral (carcinoma ductal invasivo [CDI], n = 51 e fibroadenoma, [FA], n = 21) foram fixados em formalina, submetidos à rotina histológica para inclusão em parafina. Cortes histológicos (4 µm), corados em hematoxilina e eosina foram examinados para confirmar o diagnóstico. Os cortes foram incubados em solução de anticorpo anti-cerbB-2 por 60 minutos em temperatura ambiente. A marcação foi visualizada após reação da peroxidase do cromógeno diaminobenzidina associado ao peróxido de hidrogênio. A análise morfométrica foi realizada utilizando uma estação de análise digital de imagens por meio do software de análise Optimas®. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que a superexpressão do cerbB-2 em casos de CDI é um fenômeno condizente com o estágio de proliferação das células neoplásicas e, quando analisados os casos de FA, esse marcador não exibiu qualquer correlação ou padrão específico; ao contrário, apresentaram resultados semelhantes ao tecido mamário normal. Não houve diferenças significativas entre os diferentes score qualitativos (1+, 2+ e 3+) e a análise morfométrica digital (áreas médias marcadas). Esses achados demonstram a necessidade de estudos mais acurados a fim de resolver essa dificuldade de interpretação.

ABSTRACT

Immunohistochemistry for HER-2/neu protein expression has become the most attractive routine test due to its cost, convenience and biological relevance. However, problems as to IHC staining variability and subjectivity in the interpretation of IHC conventional methods have been reported. Thus, this study aims to quantify morphometrically cerbB-2 protein immunostaining expressed in breast tumors. Mammary fragments of normal breast tissue (n = 10) and with tumoral disease (invasive ductal carcinoma, IDC, n = 51 and fibroadenoma, FA, n = 21) were fixed in formalin, processed histologically and embedded in paraffin. Hematoxylin and eosin stained sections (4 mm) were examined to confirm the diagnosis. Afterwards, they were incubated with anti-cerbB-2 antibody solution for 60 minutes at room temperature. The staining was visualized after the peroxidase reaction with diaminobenzidine chromogen associated with hydrogen peroxide. Morphometric analysis was carried out using a digital image analysis workstation based on OPTIMAS® software. From these results it may be concluded that cerbB-2 over expression in IDC cases is a phenomenon closely related to the stage of neoplastic cell proliferation. When FA cases were analyzed , this marker did not show any correlation with the staining pattern. On the contrary, FA and normal mammary tissue analysis yielded similar results. There were no significant differences between the different qualitative scores (1+, 2+ and 3+) and digital morphometric analysis (marked mean areas). These findings suggest the necessity for more accurate studies in order to clarify this interpretation issue.