Expressão heteróloga em Escherichia coli de antígenos do Schistosoma mansoni / Heterologous expression in Escherichia coli antigens of Schistosoma mansoni

RESUMO

O sistema de expressão da RNA polimerase do bacteriófago T7 foi utilizado neste trabalho para a produção de dois antlgenos de vermes adultos do Schistosoma mansoni. Esses dois antlgenos, Sm14 e Sm25, são potenciais candidatos a componentes de uma vacina anti-esquistossom6tica. A Sm14 é uma proteína solúvel e a região do gene codificadora foi diretamente clonada no vetor de expressão, pGEMEX-1. A Sm25 é uma glicoprotelna integral da membrana do tegumento de vermes adultos, por isso, para sua clonagem, foi selecionado o fragmento do gene correspondente ã região hidrofllica central da protelna. Esse fragmento foi amplificado a partir de DNA genômico de vermes adultos do Schistosoma mansoni, através de PCR. Após a clonagem dos insertos em pGEMEX-1, os plasmídeos recombinantes foram usados para transformar cepas de bactérias BL21(DE3). A padronização da expressão resultou em altos nlveis de protelnas de fusão, quando foram utilizadas as seguintes condições culturas iniciadas a partir de uma colônia retirada de placa fresca (máximo de 20 horas), incubação por mais três horas ap6s adição de IPTG e manutenção dos estoques de recombinantes a -70C, com 15% de glicerol. As protelnas de fusão foram purificadas e usadas para vacinar camundongos "outbred" e coelhos. A Sm14 recombinante teve sua imunogenicidade preservada, pois foi capaz de induzir a produção de anticorpos, que reconheceram especificamente a proteína de fusão usada na vacinação. Anticorpos anti-rSm14 também reconheceram a proteína nativa, através de "western blot". Além disso, imunização com rSm14 induziu nIveis altamente significativos de proteção em coelhos e camundongos, 89% e 60%, respectivamente. A rSm25 teve uma posslvel alteração na sua imunogenicidade, pois, apesar de induzir a produção de anticorpos capazes de reconhecer especificamente a rSm25, esses anticorpos não foram capazes de reconhecer a proteína nativa...