Amplificación por PCR de tejidos de archivo: efecto de los fijadores / PCR amplification of stored tissues: Effect of tissue-fixatives

RESUMEN

El diagnóstico a nivel de los laboratorios de Patología está aprovechando las ventajas que ofrecen las técnicas moleculares, entre ellas la alta sensibilidad, especificidad y la estabilidad y fácil manipulación del DNA. La utilidad de los datos obtenidos a partir del análisis de tejidos está directamente relacionada con la calidad de la muestra, la cual se puede ver afectada por las condiciones de manejo y almacenamiento que pueden contribuir a su deterioro o degradación. En este estudio se determinó la calidad y la integridad del DNA extraído de tejido cardíaco por análisis en electroforesis de agarosa y amplificación por Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) de fragmentos de diferentes tamaños. Adicionalmente se analizó la presencia de DNA de Trypanosoma cruzi. Los mejores resultados se obtuvieron cuando el tejido se congeló sin la utilización de fijadores. De los fijadores el que mostró los mejores resultados fue la formalina tamponada antes de su uso y el almacenamiento a –20 ºC.

ABSTRACT

The diagnosis in Patology is taking advantages offered by molecular approach, including, high sensibility, specificity, stability and facility to manipulate DNA. The usefulness of data obtained from tissue analysis is related to specimen quality, wich may be affected by conditions of manipulation and storage that may contribute to its degradation. In this report the quality and integrity of DNA obtained fron cardiac tissues was measured for electrophoretic pattern and specific amlied polymerase chain reaction (PCR) products to different sizes. DNA to T. cruzi was also amplified. Bests results for PCR products were obtained with frozen tissues without fixatives. Buffered-Formaline and incubation at -20ºC was the best fixative.