Efeitos da infecção por HPV na resposta imune e na expressão gênica global medianos pelo fator de necrose tumoral / HPV infection effects on immune response and global gene expression mediated by tumor necrosis factor

RESUMO

A infecção persistente por alguns tipos de HPV de alto risco (ex. tipos 16 e 18), é o principal fator de risco para o desenvolvimento de neoplasias intraepiteliais cervicais e lesões precursoras do carcinoma do colo uterino. Diversos estudos sugerem que a resposta imune mediada por células é fundamental para o controle e eliminação das infecções por estes e outros vírus. Um dos principais mediadores/reguladores deste tipo de resposta é o fator de necrose tumoral (TNF)... Estes dados sugerem que a aquisição de resistência à este fator é um evento importante na carcinogênese mediada por HPV. No entanto, os eventos moleculares associados ao efeito diferencial do TNF nestas linhagens são, até o momento, desconhecidos. No presente estudo, foram analisados os níveis de expressão de expressão de algumas proteínas envolvidas na via de ativação do fator NF-kB. Utilizando um anticorpo anti-IkBα, foi detectada uma proteína de aproximadamente 20KDa, induzida após 12 horas de tratamento com TNF e atingindo altos níveis de expressão em torno das 60 horas de tratamento... A expressão diferencial de alguns genes comuns nas células sensíveis ao efeito antiproliferativo do TNF, contrariamente das células resistentes, foi identificada. A expressão destes genes está relacionada à processos biológicos, como, resposta imunológica e inflamatória, proliferação e diferenciação celular e controle da transdução de sinal de diversas vias. A identificação de genes e proteínas cruciais nestes eventos, permitirá avanços no controle da infecção por HPV, além de contribuir para a eventual caracterização de marcadores moleculares na progressão tumoral do câncer cervical...(AU)

ABSTRACT

Persistent infection by some high risk HPV types (ie types 16 and 18) is the main risk factor for the development of cervical intraepithelial neoplasia and the precursor lesions of cervical cancer. Many studies suggest that cellmediated immunity is important for viral infection contrai and clearence. Tumor necrosis factor (TNF) is one of the main mediators/regulators of inflammatory response. TNF has a potent anti-proliferative effect on normal and HPV16 immortalized keratinocytes (HF698). On the other hand, HPV-18 immortalized keratinocytes (HF18Nco) and severa! cervical carcinomaderived cell lines, are resistant to TNF. These observations suggest that the acquisition of TNF-resistance may constitute an important step in HPV mediated carcinogenesis. However, the molecular basis of this difference is not well understood. In the present study, we analyzed the effect of TNF on NF-KB pathway activation. Using an anti-IKBa antibody, we detected a protein of 20 kDa induced after 12 hours of treatment with TNF. This protein reached higher leveis of expression after 60 hours of treatment. Besides, we found that this protein is constitutively express in the HPV16-immortalized cell line. Severa! experiments are being conducted in arder to identify this protein. Furthermore, we addressed the effect of 3 and 60 hours of TNF treatment on global gene expression of primary human keratinocytes and two HPV-immortalized keratinocytes-derived cell !ines. We observed the differential expression of severa! genes common to both TNF-sensitive cell lines. On the other hand, this was not observed in the TNF-resistant cell line. These genes are involved in immune and inflammatory response, cell proliferation and differentiation and 1n signal transduction contrai. Understanding the mechanisms of host response regulation, as well as the identification of new genes and proteins involved in its regulation, may provide new strategies for HPV infection contrai (AU)