Ausência de mutações no proto-oncogene RET relacionadas com carcinoma medular de tireoide em pacientes com doença de Hirschsprung / Absence of RET proto-oncogene mutations related with medullary thyroid carcinoma in patients with Hirschsprung disease

RESUMO

Objetivo: O objetivo desse estudo é avaliar, em pacientes com Doença de Hirschsprung, a incidência e o tipo de mutações no proto-oncogene RET encontradas. Método: Foram estudados 15 pacientes com diagnóstico de Doença de Hirschsprung. As características fenotípicas foram obtidas através de entrevista com os pacientes e familiares e através de revisão de prontuário. As características genotípicas foram obtidas como se segue dos leucócitos do sangue periférico foi extraído o DNA genômico. Amplificamos os exons 10, 13 e 16 através da Reação de Polimerase em Cadeia (PCR). O produto PCR foi purificado e submetido à sequenciamento direto, e os resultados do sequenciamento foram analisados utilizando sequências previamente depositadas no GeneBank. Resultados: Os pacientes apresentaram a distribuição por sexo de 13 do sexo masculino (86,7%) e 2 do sexo feminino (13,3%).A idade atual variou de 2 a 16 anos, com a média de 7 anos. Nenhum dos pacientes apresentou características fenotípicas de Neoplasia Endócrina Múltipla tipo 2A, 2B ou Carcinoma Medular de Tireoide Familiar, ou havia antecedente familiar positivo para essas doenças. Quanto às características genotípicas o produto do sequenciamento genético, não apresentou alterações nos exons 10 e 16 em nenhum paciente, mas foi encontrado um polimorfismo em heterozigose no exon 13 no códon 769 em 4 pacientes. Conclusões: não foram encontradas mutações no proto-oncogene RET concomitantes à Neoplasia Endócrina Múltipla tipo 2A, 2B ou Carcinoma Medular de Tireoide Familiar, nos pacientes com Doença de Hirschsprung estudados, sendo encontrado polimorfismo no códon 769 em 4 pacientes.

ABSTRACT

Objective: To assess the frequency of mutations of the RET proto-oncogene in patients with Hirschsprung´s Disease and its association with Multiple Endocrine Neoplasia type 2. Method: 15 patients with Hirschsprung´s Disease were evaluated, regarding the phenotypic and genotypic characteristics. The phenotypic characteristics were obtained by interview and patients´ charts evaluation. Genotypic characteristics evaluation genomic DNA was extracted from peripheral blood lymphocytes. Primers specific for exons 10, 13 e 16 of the RET gene were designed and used to generate Polimerase Chain Reaction products, which were purified and directly sequenced. The 3 exons were sequenced in both directions - sense and antisense - and the results analyzed using the sequences deposited on GeneBank. Results: Thirteen (86.7%) patients were male and 2 (13.3%) female. The age mean age was 7 years old, ranging from 2 to 16 years old. No patient presented phenotypic characteristics of Multiple Endocrine Neoplasia type 2, or familial history. Regarding the genotypic characteristics, no patient presented mutations on exons 10 or 16, but 4 patients presented a heterozigotic polymorphism on exon 13, codon 769. Conclusion: there was no concomitant mutation on the RET proto-oncogene, of Multiple Endocrine Neoplasia type 2 and Hirschsprung´s Disease in the patients studied.