Isolamento, caracterização, diferenciação e uso terapêutico de células-tronco adultas obitidas da polpa dentária murina / Isolation, characterization, differentiation and therapeutic use of adult stem cell deaths in murine dental pulp

RESUMO

Diversos estudos têm demonstrado que a polpa dentária humana é uma fonte de células-tronco. Neste trabalho nós caracterizamos células obtidas da polpa do dente de camundongos (CTMDC) e o seu efeito terapêutico em um modelo de diabetes em camundongos. O tecido pulpar foi separado do dente incisivo e cultivado in vitro. Foi investigada a expressão de marcadores de células-tronco nas culturas celulares obtidas e a integridade genética. A diferenciação adipogênica e osteogênica foi induzida após o cultivo das células em meios específicos. Camundongos foram tratados com 80 mg/kg de estreptozotocina (ETZ) e transplantados após 10 dias com CTMDC ou salina. Os níveis de glicose no sangue, proteinúria, glicosúria e creatinina foram avaliados atmvés de dosagens bioquímicas. A migração celular para o pâncreas foi analisada por imunofluorescência. A diferenciação espontânea em adipócitos foi confirmada pela marcação com óleo vermelho, sudan black e por microscopia eletrônica. As CTMDC são aderentes ao plástico, polimórficas e altamente proliferativas. Algumas células alongadas adquiriram a capacidade de contração após 28 dias de cultura. As CTMDC apresentaram um cariótipo normal até a quinta passagem. A expressão de marcadores hematopoiéticos não foi detectada, enquanto que foi observada a expressão dos marcadores mesenquimais CD90, Sca-1, STRO-1 e CD73. Na análise da expressão de marcadores embrionários observou-se a expressão de SSEA-1 por imunofluorecência e dos fatores de transcrição REX-1 e OCT-4, mas não de NANOG, por RT-PCR. A diferenciação osteogênica e adipogênica foi observada após duas semanas de cultivo em meios específicos. Dezesseis dias após o transplante de CTMDC, camundongos com hiperglicemia induzida por ETZ apresentavam os níveis de glicose no sangue menores quando comparados com o grupo controle injetado apenas com salina. Os níveis de glicosúria, proteinúria e creatinina foram significantemente reduzidos nos camundongos transplantados com CTMDC...