Formação de biofilme in vitro por Streptococcus sanguinis e Candida albicans, associados, em implantes dentários submetidos a diferentes tratamentos de superfície / In vitro adherence of Streptococcus sanguinis and Candida albicans to dental implants with different surface treatment

RESUMO

O objetivo deste estudo foi avaliar a formação de biofilme in vitro por Streptococcus sanguinis e Candida albicans, associados, em implantes dentários com diferentes tratamentos de superfícies. Foram utilizadas cepas padrão de Streptococcus sanguinis (ATCC10556) e Candida albicans (ATCC 18804). Dos 30 implantes utilizados, dez possuíam superfície lisa (SL), dez foram tratados com duplo ataque ácido (AA) e dez com nanopartículas de hidroxiapatita (NH). Os implantes foram imersos em saliva humana, centrifugada e filtrada, por 60 minutos. Posteriormente, foram transferidos para 1,5 ml de caldo sacarosado e inoculados com 0,1 ml de suspensão de Streptococcus sanguinis (106cél/mL) e incubados em estufa com 5% de CO2 a 37°C. Após 24 horas, os implantes foram transferidos para novo caldo, inoculados com suspensão de Candida albicans (106cél/mL) e incubados por mais 24 horas a 5% de CO2 a 37°C. Os implantes foram lavados e os microrganismos desprendidos em solução fisiológica em agitador ultrassônico. Foram realizadas diluições e alíquotas semeadas em placas com ágar Sabouraud com cloranfenicol e ágar Mitis Salivarius acrescido de bacitracina (0,2 UI/mL) e sacarose (15%), para o crescimento, respectivamente, das leveduras e bactérias, e incubadas a 37°C/48 h. Os números de UFC/ml em log10 foram analisados estatisticamente (Anova, teste de Tukey, p < 0.05). A bactéria Streptococcus sanguinis apresentou maior índice de aderência, porém, sem diferença estatisticamente significante entre os implantes. A aderência de Candida albicans, foi menor nos implantes tratados por NH, com diferença estatisticamente significante em relação os implantes de SL (p = 0,012) e de AA (p = 0,000).

ABSTRACT

The purpose of this study was to evaluate in vitro adherence of Streptococcus sanguinis and Candida albicans to dental implants with different surface treatment. Standard strains of Streptococcus sanguinis (ATCC10556) and Candida albicans (ATCC 18804) were used. Of the 30 implants used, 10 had a smooth surface (SS), 10 were treated with double acid attack (AA), and 10 with hydroxyapatite nanoparticles (NH). The implants were immersed in human saliva, centrifuged and filtered for 60 minutes. Subsequently, were transferred to 1.5 mL of Gibbons and Nygaard broth and inoculated with 0.1 ml of Streptococcus sanguinis (106cells/mL), and incubated in an incubator with 5% CO2 at 37°C. After 24 h, the implants were transferred to new broth, inoculated with the suspension of Candida albicans (106cells/mL), and incubated for another 24h with 5% CO2 at 37°C. The implants were washed in sterile saline solution in order to remove loosely bound material. The implants were placed into tubes with sterile saline solution and sonicated for 30s. Ten-fold serial dilutions were carried out and aliquots plated on Sabouraud agar with chloramphenicol and Mitis salivarius agar with bacitracin (0.2 IU/mL) and sucrose (15%) for growth, respectively, of yeast and bacteria, and incubated at 37°C/48 h. Then, the numbers CFU/mL (log10) were counted and analyzed statistically (Anova, Tukey´s test, p < 0.05). It was concluded that Streptococcus sanguinis had a higher rate of adhered cells, but with no statistically significant difference among implants. The adherence of Candida albicans was lower in the implants treated with NH, being statistically significant compared to SL (p = 0.012) and AA (p = 0.000) implants.