Desarrollo de un método para la extracción depolifenol oxidasa de uchuva (Physalis peruviana L. )y aislamiento por sistemas bifásicos acuosos / Development of an extraction method of golden berry (Physalis peruviana L. ) polyphenol oxidase and isolation by aqueous two-phase system
Vitae (Medellín)
;
18(2): 124-132, 2011. ilus, graf
Artículo
en Español
| LILACS
| ID: lil-600230
RESUMEN
La polifenol oxidasa es la enzima responsable del pardeamiento de frutas y vegetales, en los que ocasiona disminución de las propiedades organolépticas y nutricionales. En este trabajo se evaluó la influencia de las condiciones de extracción (pH, concentración, composición del buffer y precipitación proteica) sobre la actividad de la polifenol oxidasa extraída de uchuva. La actividad polifenol oxidasa más alta se obtuvo al extraer la enzima utilizando buffer fosfato 0,2 M pH 6,0 suplementado con Triton® X-100 y polivinil pirrolidona y concentrando las proteínas con acetona fría en una proporción sobrenadante:acetona 1:1. Posteriormente, la polifenol oxidasase purificó parcialmente utilizando sistemas bifásicos acuosos formados por polietilenglicol y fosfato. Se evaluó el efecto de la composición de las fases, el peso molecular del polietilenglicol y el pH. Los mejores resultados se obtienen con un sistema formado por 5% de polietilenglicol 8000 y 14% de fosfato, en un pH de 5,5 con un factor de purificación de 4,65, un Ka de 4,70 y un porcentaje de rendimiento en la fase superior de 74,29%. Estos resultados indican un efecto significativo de las condiciones de extracción sobre la actividad polifenol oxidasa y proporcionan un método rápido, simple y eficiente para el aislamiento de esta enzima.
ABSTRACT
Polyphenol oxidase activity is responsible for the enzymatic browning of fruits and vegetables, and the endproducts of the catalyzed reaction are detrimental to food quality, in both sensory and nutritional properties. Inthis study we evaluated the influence of the extraction conditions (pH, concentration, composition of extractionbuffer and protein precipitation agent) on the activity of golden berry polyphenol oxidase. The extraction ofproteins with a mixture of Triton® X-100 and polyvinyl pyrrolidone in 0.2 M phosphate buffer at pH 6.0 andprecipitation with cold acetone in a ratio supernatant-acetone of 1:1 gave the higher polyphenol oxidase activity.Partial purification of polyphenol oxidase was achieved using an aqueous two-phase system composed bypolyethylene glycol and phosphate. Effect of phase composition, molecular weight of polythylene glycol and pHof the system on enzyme partitioning was studied. The optimum system was found at pH 5.5 containing 5%polythylene glycol 8000 and 14% phosphate, with Ka of 4.70, purification factor of 4.65 and a 74.29% yield ofenzyme activity in the top phase. These results show a significant effect of extraction conditions on polyphenoloxidase activity and provide a quick, simple and efficient method for polyphenol oxidase isolation.
Texto completo:
Disponible
Índice:
LILACS (Américas)
Asunto principal:
Fenoles
/
Physalis
Idioma:
Español
Revista:
Vitae (Medellín)
Asunto de la revista:
Farmacia
/
Química
Año:
2011
Tipo del documento:
Artículo
País de afiliación:
Colombia
Institución/País de afiliación:
Universidad de Antioquia/CO
Similares
MEDLINE
...
LILACS
LIS