Optimización de la extracción de ADN de Passiflora ligularis para el análisis por medio de marcadores moleculares / Aperfeiçoamento da extração do DNA de Passiflora ligularis para análise através de marcadores moleculares / Extraction of high quality DNA of passiflora ligularis for its analysis with molecular markers
Univ. sci
; 14(1): 16-22, ene.-abr. 2009. ilus, graf
Article
en Es
| LILACS
| ID: lil-603980
Biblioteca responsable:
CO185.1
RESUMEN
Objetivo. Estandarizar un protocolo de extracción de ADN eficiente y preciso para Passiflora ligualaris. Materiales y métodos. Se evaluaron dos métodos de extracción de ADN y dos tipos de tejido de Passiflora ligularis en términos de pureza, calidad y cantidad de ADN obtenido, al igual que su aplicabilidad en técnicas moleculares basadas en PCR como los RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA). La cuantificación de ADN se realizó mediante espectrofotometría de absorbancia a una longitud de onda de 260nm (A260) usando el espectrofotómetro Beckman Du® 530, de igual manera se obtuvo una estimación de la pureza del ADN por medio de la relación de absorbancia (A260/A280nm). Las variables analizadas en este estudio fueron el método de extracción (A) y el tipo de tejido (B), con el fin de definir la influencia que éstas tuvieron en la pureza y cantidad de ADN extraído. Para el estudio de estas variables se usó un diseño aleatorio con arreglo factorial 2 x 2...
ABSTRACT
Extraction of high quality DNA of Passiflora ligularis for its analysis with molecular markers. Objective. To standardize a precise and efficient DNA isolation protocol of Passiflora ligularis. Materials and methods. Two methods of DNA extraction and two different tissues of Passiflora ligularis were evaluated in terms of purity, quality and quantity of DNA yield, as well as DNA's suitability for molecular techniques based on PCR such as RAPDs. Quantification of DNA was done using absorbance spectrophotometry at a wavelength of 260nm (A260) with a Beckman Du ® 530 spectrophotometer. An estimate of the DNA's purity was obtained using the absorbance ratio (A260 / A280 nm). The variables analyzed in this study were the extraction method (A) and the tissue type (B), in order to define their influence on the purity and quantity of the DNA extracted. For the study of these variables a random design with a 2 x 2 factorial arrangement wasused. Results. The average quantities of DNA obtained with the modified method of Mc Couch et al. (1988) and the modified method of Doyle & Doyle (1991) method were 778.9 µg/ml and 660.1 µg/ml respectively for dry tissue. Averages with fresh tissue were 1543.3 µg/ml and 820.4 µg/ml respectively. Conclusion. Based upon our results we suggest the use of Mc Couch et al. (1988) method with fresh leaftissue to obtain a high quality DNA suitable to be used with RAPDs molecular markers...
RESUMO
Aperfeiçoamento da extração do DNA de Passiflora ligularis para análise através de marcadores moleculares. Objetivo. Padronizar um protocolo de extração eficiente e preciso do DNA para Passiflora ligularis. Materiais e métodos. Avaliaram-se dois métodos deextração do DNA em dois tipos de tecido de Passiflora ligularis em termos de pureza, qualidade e quantidade do DNA obtido, assim como, sua aplicabilidade em técnicas moleculares baseadas em PCR como os RAPD. A quantificação do DNA realizou-se mediante espectrofotometria de absorbância numa longitude de onda de 260nm (A260) usando o espectrofotômetro Beckman DU® 530, em formasimilar, obteve-se uma estimação da pureza do DNA por meio da relação de absorbância (A260/A280nm). As variáveis analisadas neste estudo foram o método de extração (A) e o tipo de tecido (B), com a finalidade de definir a influência que estas tiveram na pureza e quantidade do DNA extraído. Para o estudo destas variáveis empregou-se um desenho aleatório com arranjo fatorial 2 X 2. Resultados. Aquantidade media do DNA obtido com o método de Mc Couch et al (1988) modificado e Doyle & Doyle (1991) modificado, foi 778,9 µg/ml y 660,1 µg/ml respectivamente para o tecido seco; para o tecido fresco as medias foram 1543,3 µg/ml e 820,4 µg/ml respectivamente.Conclusão. Considerando os resultados obtidos propõe-se que com o método de Mc Couch et al (1988) e utilizando tecido folhar fresco obteve-se um DNA de ótima qualidade para ser utilizado nos marcadores RAPD...
Palabras clave
Texto completo:
1
Índice:
LILACS
Asunto principal:
ADN
/
Marcadores Genéticos
/
Passiflora
Tipo de estudio:
Clinical_trials
Idioma:
Es
Revista:
Univ. sci
Asunto de la revista:
MEDICINA
Año:
2009
Tipo del documento:
Article