Caracterização molecular de uma nova proteína tirosina quinase, SmFes de Schistosoma mansoni / Molecular characterization of a new protein tyrosine quinase, SmFes Schistosoma mansoni

RESUMO

A identificação de moléculas sinalizadoras e a elucidação de processos de transdução de sinal de Schistosoma mansoni são necessárias para o entendimento da interação hospedeiro parasito e de processos fisiológicos do parasito. Proteínas tiro sinas quinase (PTKs) são moléculas importantes na comunicação intra e intercelular, tendo um papel crucial nos mecanismos de transdução de sinal. Estas proteínas estão envolvidas nos processos de desenvolvimento, diferenciação e comunicação celular entre outros. Uma nova PTKs foi identificada em S. mansoni e nomeada, SmFes. SmFes é um gene de cópia única e o seu cDNA completo contém uma ORF de 3.780 pb. SmFes exibe características da família Fes/Fps/Fer das PTKs, com assinaturas de domínio proteína quinase, SH2 e coiled-coil característicos. SmFes é o primeiro gene da família Fes/Fps/Fer identificado em S. mansoni. Análise filogenética revelou que SmFes está relacionada a proteínas da família Fes/Fps/Fer, agrupadas mais próximas às proteínas ortólogas de organismos inveliebrados. O alinhamento entre o cDNA de SmFes e seqüências genômicas depositadas pelos bancos de dados de S. mansoni indicaram a presença de 17 introns, alguns demonstrados experimentalmente. Análises parciais de clones de cDNA indicaram a inserção de 9 pb na posição 3' do exon 10,formando duas populações de cDNA, comprovadas por RFLP. A análise da seqüência genômica indicou que existem dois possíveis sítios de edição do RNA na proximidade 5' do intron, indicando um evento de edição alternativa. A existência de um alelo contendo uma inserção de 15 pb na seqüência genômica foi observada. As amplificações de diferentes espécies de Schistosoma com pares de iniciadores desenhados para SmFes indicaram a presença de ortólogos de SmFes em várias espécies do gênero. SmFes é transcrita em baixos níveis nas diversas fases de desenvolvimento do parasito, com uma maior taxa de transcrição em vermes machos, como detectado por PCR em tempo real e northern-blot. A expressão da rproteína SmFes foi verificada em esporocisto miracídio, verme adulto e em nível mais elevado em cercária. uma proteina recombinante de SmFes foi expressa para ser usada em experimentos de identificação de parceiros de SmFes em futuros ensaios de co-precipitação e também em experimentos de duplo híbrido. Vários possíveis parceiros de SmFes foram identificados por análise computacional. A compreensão de genes envolvidos nos mecanismos de transdução de sinal pode fornecer novas estratégias de desenvolvimento de drogas.