Diagnóstico laboratorial do vírus da herpes simples tipo 1 e inibição da replicação do HSV-1 utilizando RNA de interferência / Laboratory diagnosis of herpes simplex virus type 1 replication and inhibition of HSV-1 using RNA interference

RESUMO

O vírus da herpes simples é uma importante causa de morbidade, especialmente em pacientes imunossuprimidos. O vírus herpes [simplex] tipo 1 (HSV1) é um patógeno humano pertencente à família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae. O HSV1 infecta a mucosa oral e provoca a maioria das formas de herpes não genital, embora também possa infectar a mucosa genital em humanos. Os objetivos deste estudo foram otimizar a reação de PCR em tempo real para auxiliar o diagnostico, detecção e quantificação do HSV1 em pacientes imunodeprimidos; e avaliar o uso do RNA de interferência (siRNA) para inibia a replicação do vírus HSV1 in vitro, como uma alternativa para terapia antiviral. Para o diagnostico do HSV1 foram analisadas 27 amostras de pacientes; amostras de saliva e raspado da lesão (swab) de 6 pacientes com lesões características da infecção pelo HSV1 e 21 amostras de pacientes infectados com o HSV1 e HIV (vírus da imunodeficiência humana). Para o estudo do silenciamento do HSV1, três seqüências específicas de siRNA foram avaliadas (seqüência 1, 2 e 3) como uma estratégia contra o gene UL 39 do HSV1. Este gene é uma subunidade da ribonucleotídeo redutase, que tem a função de catalisar o passo limitante na síntese do deoxiribonucleotídeos necessários para a síntese do DNA. Nos pacientes infectados com o HSV1, todas as amostras foram positivas na detecção do HSV, DNA por PCR em tempo real e [em 70 porcento] destas amostras foi possível o isolamento viral. Entre os pacientes infectados com HIV, 90,48 porcento foram positivas para anti HSV e a co infecção HIV, HSV foi detectada em 100 porcento das amostras estudadas por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que o PCR em tempo real foi eficiente na detecção e quantificação do HSV1 em diferentes tipos de amostras, e os níveis de carga viral variaram entre 10 elevado ao quadrado menos 10 elevado ao quadrado. Foi [demostrado] que a melhor concentração de siRNA utilizada para inibir o gene unidade de litro 39 do HSV1 foi estabelecido em 10 unidade miligrama através da curva dose-dependentes com as três seqüências inibindo a replicação viral, no entanto a seqüência 1 foi capaz de inibir até 99 porcento da replicação da cepa KOS e da amostra de isolado viral de um paciente infectado com HSV1. Os resultados demonstraram que o PCR em tempo real fornece resultados rápidos, com excelente sensibilidade e especificidade, e isso é especialmente importante para o diagnostico em pacientes imunodeprimidos. As seqüências de siRNA analisadas foram eficazes na inibição da replicação do HSV1 in vitro, porém outras investigações sobre os possíveis efeitos benéficos do siRNA in vivo são necessários.