Ativação da resposta imune inata mediada por receptores do tipo toll em infecção por vírus herpes simplex tipo 1(HSV-1) em modelo murino / Activation of the innate immune response mediated by toll receptors type in infection herpes simplex virus type 1 (HSV-1) in murine model

RESUMO

Este trabalho foi realizado no laboratório de Imunopatologia do Centro de Pesquisa RenéRachou (CPqRR) e no Laboratório de Vírus (Labvirus) da Universidade Federal de MinasGerais (UFMG). Os herpesvirus possuem genoma DNA e são envelopados.Aproximadamente 70% dos adultos já tiveram contato com Herpes Simplex tipo 1 (HSV-1).O HSV-1 causa úlceras ou até mesmo lesões mais graves como encefalite, e após a infecção,o vírus comumente fica latente e pode ser ou não reativado. Células do sistema immuneinato, através dos “Receptores do Tipo Toll” (TLRs), reconhecem “padrões molecularesassociados a patógenos” (PAMPs) orquestrando a resposta imune contra o vírus. Quando ativados, TLRs iniciam uma cascata de sinalização que culmina na ativação de genesrelacionados à defesa imune inata (óxido nítrico-NO, citocinas e quimiocinas). Outros estudosdo grupo mostraram que animais nocautes (KO) para TLR9 ou TLR2/9 apresentam altamortalidade na infecção por HSV-1, ao contrário dos C57BL/6 selvagens (WT) e TLR2KO,que são capazes de controlar o vírus. Objetivamos pesquisar a interrelação na expressão dosTLRs 1, 2, 3, 6, 7 e 9 em animais TLR2 KO, TLR9 KO e TLR2/9 KO infectados por HSV-1e principais citocinas, células e mecanismos imune celulares contra infecção por HSV-1. Nopresente trabalho camundongos WT, TLR2KO, TLR9KO e TLR2/9KO foram infectados viaintranasal com 106 u.f.p. de HSV-1, e seus controles receberam PBS. A eutanásia dos animaisfoi realizada no 5º dia após infecção (dpi), que previamente já foi demonstrado ser o pico dainfecção neste modelo, e então gânglios trigêmeos (TG) e cérebros foram coletados. Aexpressão de TLRs 1, 2, 3, 6, 7 e 9 foi avaliada por PCR em Tempo Real. Camundongos WTinfectados apresentaram diferença significativa na expressão destes TLRs comparados comseus respectivos controles no TG, mas não no cérebro. Nos KOs, houve aumento da expressãodos TLRs tanto nos TGs (mas com níveis mais moderados comparado aos WT) quanto noscérebros. Também foi avaliada a expressão de gp91phox, p22phox e iNOS. A expressão de iNOSem C57BL/6 WT infectados foi maior que nos outros grupos, mas o mesmo não ocorreu paragp91phox, p22phox. Adicionalmente, foi mensurada a produção de NO por macrófagosintraperitoneais, através da reação de Griess, que demonstrou maior produção por macrófagosWT, comparados aos grupos TLR KOs. Ensaios de histopatologia e imunofluorescênciademonstraram maior celularidade nos TGs infectados, além de confirmar a presença de CD8,macrófagos, e aumento da produção de iNOS nos C57BL/6 WT infectados, o que não ocorreucom os camundongos TLRs KO. Em ensaio de sobrevivência com C57BL/6 WT, CCL3 KO,CD8 KO, RAG KO e iNOS KO a importância das células T e do iNOS foi confirmada, umavez que CD8 KO, RAG KO e iNOS KO tiveram 0% de sobrevida. Camundongos C57BL/6WT, RAG KO, CCL3 KO e iNOS KO tiveram seus TGs analisados por PCR em tempo realpara verificar a expressão do gene viral VP-16 e MCP-1, iNOS, IP-10, Rantes e TNF- no 5ºdpi. Estes dados indicaram a relevância de iNOS e das célúlas T na resposta inata contra oHSV-1, uma vez que os RAG KO foram irresponsivos à expressão das citocinas, enquanto osiNOS KO apresentaram uma resposta exacerbada das mesmas. Ensaio de citometria indicouque IFN produzido pelas células T CD8, nos TGs, e produzido pelas células T CD4 eNatural Killer (NK), nos linfonodos regionais, são um possível mecanismo de controle contraa infecção de HSV-1 dos animais WT infectados. Hipotetizamos que a expressão coordenadade TLRs reflete na orquestração eficiente do sistema imune inato, através da produçãoequilibrada de quimiocinas e citocinas e da atividade imune celular adequada, com produçãode NO por macrófagos e ação de células T CD8, T CD4 e NK controlando a infecção porHSV-1.