Calcium citrate improves the epithelial-to-mesenchymal transition induced by acidosis in proximal tubular cells / Citrato de cálcio melhora a transição epitélio-mesenquimal induzida por acidose em células do túbulo proximal

ABSTRACT

INTRODUCTION: Epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) is a key event in renal fibrosis. The aims of the study were to evaluate acidosis induced EMT, transforming-growth-factor (TGF) β1 role and citrate effect on it. METHODS: HK2 cells (ATCC 2290) were cultured in DMEM/HAM F12 medium, pH 7.4. At 80% confluence, after 24 hr under serum free conditions, cells were distributed in three groups (24 hours) A) Control pH 7.4, B) Acidosis pH 7.0 and C) Calcium citrate (0.2 mmol/L) + pH 7.0. Change (Δ) of intracellular calcium concentration, basal and after Angiotensin II (10-6M) exposition, were measured to evaluate cellular performance. EMT was evaluated by the expression of α-smooth muscle actin (α-SMA) and E-cadherin by immunocytochemistry and/or Western blot. TGF-β1 secretion was determined by ELISA in cell supernatant. RESULTS: At pH 7.0 HK2 cells significantly reduced E-cadherin and increased α-SMA expression (EMT). Supernatant TGF-β1 levels were higher than in control group. Calcium citrate decreased acidosis induced EMT and improved cells performance, without reduction of TGF-β production. CONCLUSIONS: Acidosis induces EMT and secretion of TGF-β1 in tubular proximal cells in culture and citrate improves cellular performance and ameliorates acidosis induced EMT.

RESUMO

INTRODUÇÃO: A transição epitélio-mesenquimal (TEM) é um evento chave na fibrose renal. Os objetivos do estudo foram avaliar se o citrato seria capaz de reverter a TEM induzida por acidose, e qual seria o papel do fator de crescimento transformador (TGF) β1 neste evento. MÉTODOS: Células de túbulo proximal (HK2) foram cultivadas em meio DMEM-F12, pH 7,4. Após confluência, as células foram distribuídas em três grupos A) controle pH 7,4, B) Acidose pH 7,0 e C) Acidose pH 7,0 + citrato de cálcio (0,2 mmol/L). A variação na concentração de cálcio intracelular, antes e após a adição de angiotensina II (10-6M) foi medida para avaliar o desempenho celular. TEM foi avaliada pela expressão de α-actina de músculo liso (α-SMA) e E-caderina por imunocitoquímica e/ou de Western blot. A secreção de TGF-β1 foi determinada por ELISA no sobrenadante. RESULTADOS: Em pH 7,0, houve redução significante na expressão de E-caderina e aumento de α-SMA indicando a presença de TEM e a concentração de TGF-β1 foi maior do que no grupo controle. O citrato de cálcio melhorou TEM induzida pela acidose e a resposta das células à angiotensina II, sem redução do TGF-β. CONCLUSÕES: Acidose induz TEM e secreção de TGF-β1 em células tubulares proximais em cultura e o citrato melhora o desempenho celular e a TEM induzida por acidose.