Viability and molecular authentication of Coccidioides spp. isolates from the Instituto de Medicina Tropical de São Paulo culture collection, Brazil / Viabilidade e autenticação molecular de isolados de Coccidioides spp. da coleção de culturas do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, Brasil

ABSTRACT

Coccidioidomycosis is an emerging fungal disease in Brazil; adequate maintenance and authentication of Coccidioides isolates are essential for research into genetic diversity of the environmental organisms, as well as for understanding the human disease. Seventeen Coccidioides isolates maintained under mineral oil since 1975 in the Instituto de Medicina Tropical de São Paulo (IMTSP) culture collection, Brazil, were evaluated with respect to their viability, morphological characteristics and genetic features in order to authenticate these fungal cultures. Only five isolates were viable after almost 30 years, showing typical morphological characteristics, and sequencing analysis using Coi-F and Coi-R primers revealed 99% identity with Coccidioides genera. These five isolates were then preserved in liquid nitrogen and sterile water, and remained viable after two years of storage under these conditions, maintaining the same features.

RESUMO

Coccidioidomicose é uma doença emergente no Brasil; a manutenção adequada e autenticação de isolados de Coccidioides spp são essenciais para a pesquisa em diversidade genética de micro-organismos, bem como para a compreensão da doença em humanos. Dezessete isolados de Coccidioides preservados em óleo mineral desde 1975 na coleção de culturas do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo (IMTSP) foram avaliados com relação à viabilidade, características morfológicas e genéticas, com o objetivo de autenticação das culturas fúngicas. Dos 17 isolados, apenas cinco foram viáveis após quase 30 anos mantidos em óleo mineral, apresentando características morfológicas e moleculares típicas do gênero, o sequenciamento utilizando os oligonucleotídeos Coi-F e Coi-R revelou identidade de 99% com isolados de Coccidioides. Estes cinco isolados foram preservados em nitrogênio líquido e água destilada esterilizada, e permaneceram viáveis após dois anos de armazenamento sob estas condições, mantendo as mesmas características.