Seguridad viral de la Gammaglobulina anti-D / Viral safety in human anti-D immunoglobulin

RESUMEN

Introducción. El Parvovirus B19 humano (B19) es considerado como uno de los mayores contaminantes de plasma, sangre y hemoderivados. Con el propósito de reducir el riesgo de contaminación, la Farmacopea Europea estableció el control por PCR del ADN del Parvovirus B19 en los pool es de plasma destinados a la producción de Gammaglobulina anti-D (Rh), un producto utilizado en mujeres embarazadas para pre­venir la enfermedad hemolítica del recién nacido. Además del control del ADN viral se aplican otros procesos y procedimientos adicionales para optimizar la seguridad viral y el aprovechamiento de la materia prima. Objetivos. Demostrar que el control por PCR del ADN/B19, la presencia de anticuerpos neutralizantes y la inactivación viral por pasteurización en la producción de preparados de Gammaglobulina anti-D permiten obtener un hemoderivado seguro. Materiales y Métodos. Los pooles de plasma fueron analizados para ADN/B19 mediante una técnica de PCR "in house" de adecuada sensibilidad y validada con un Standard Internacional. La extracción del ADN se realizó con columnas de sílica y la amplificación se realizó con primers específicos. Se analizaron los anticuerpos IgG contra proteína VP2 del B19 por ELISA en muestras de plasma de donaciones individuales. Se validó la pasteurización como método de inactivación viral, con virus envueltos y desnudos y se controlaron las Gammaglobulinas anti-D por PCR para descartar presencia de ADN del parvovirus B19 en producto final. Resultados. Se detectó que el 18% (n= 73) del total de pooles de plasma por PCR poseen una carga mayor a 1500 UI/ ml y el 82% con títulos menores a 1500 UI/ml. Los anticuerpos IgG anti-VP2 del B19 fueron detectados en el 75% de las muestras de plasma de donaciones individuales. La pasteurización resultó efectiva para virus envueltos y desnudos donde se detectó una pérdida de la infectividad mayor a 4.0 log de virus... (TRUNCADO)

ABSTRACT

Background. Human Parvovirus B19 (B19) is recognized as one of the majors contaminants of plasma, blood products and plasma-derived products. To reduce the risk of contamination, B19 DNA plasma pool testing by PCR during the manufacturing of anti-D Inmunoglobulin has been established by European Pharmacopoeia. This is a plasma-derived product used in pregnant women to prevent the hemolytic disease of the newborn. In addition, to optimize the viral safety and minimize the loose of plasma pools, additionals practises and procedures are implemented. Objectives. Demonstrate the B19 DNA control by PCR, the presence of antibodys with neutralizing activity and the viral inactivation by pasteurization in manufacturing of anti-D Inmunoglobulin are suitables procedures to allow to obtain a safety plasma-derived product. Materials and methods. The plasma pools were tested for B19 DNA by an "in house" PCR technique with appropriate sensitivity and validated with an Internacional Standard. The DNA was extracted with silica columns and the amplification reaction was made with specific primers. Plasma single donations were tested for VP2-specific anti-B19 IgG antibodies by ELlSA. The pasteurization was validated as a viral inactivation method, against enveloped and nude viruses. Anti-D inmunoglobulin batches were analized with PCR to ensure the absence of B19 DNA. Results. Of 73 plasma pools, 18% were found to be B19 DNA positive with a viralload > 1500 IU/ml and 82% were < 1500 IU/ml. 75% of single plasma donations were positive for VP2-specific anti-B 19 IgG antibodies. The pasteurization was effective for enveloped and nude viruses where the lost of infectivity was > 4.0 log of virus. AII anti-D inmunoglobulin batch es were negatives for B19 DNA by PCR... (TRUNCATED)