Aislamiento de plásmidos conjugativos en cepas de enterobacterias productoras de ß-lactamasas de espectro expandido / Isolation of conjugative plasmids in enterobacteriaceae strains producing beta-lactamases expanded sprectrum

RESUMEN

Las ß-lactamasas de espectro expandido son enzimas capaces de hidrolizar el enlace amida de los oximino ß-lactámicos, (cefotaxime, ceflazidime y aztreonam). Las mismas son codificadas en plásmidos y por lo tanto pueden ser transferidas mediante conjugación a diversos géneros bacterianos. Diseminándose ampliamente en el ambiente hospitalario. En esta investigación se persigue, en cepas de enterobacterias aislar plásmidos que codifican para ß-lactamasas de espectro expandido y que sean capaces de transferirse mediante conjugación. Se estudio una población de 51 enterobacterias productoras de ß-lactamasas de espectro expandido aisladas de diferentes centros hospitalarios del área Metropolitana de Caracas. A las mismas se le determinó el perfil de resistencia a múltiples antibióticos mediante la metodología de Kirby-Bauer. Se detectaron las BLEE mediante dos ensayos fenotípicos basados en el efecto sinergístico con el ácido clavulánico y se tipificaron molecularmente por PCRIRFLP, seguidamente se transfirieron los plásmidos conjugativos en ensayos de conjugación en medio sólido y se aislaron los plásmidos de cepas donantes y transconjugautes, por el método de lisis alcalina. Los resultados fenotípicos indican una mayor proporción de BLEE con actividad ceflazidimasa y en menor grado actividad cefotaximasa. La tipificación molecular indicó que 60,8 por ciento de las cepas portan genes tipo SHV y 15,6 por ciento codifican ß-lactamasas de espectro expandido de la familia CTX-M. De 36 cepas conjugadas un 81 por ciento transfirió material plasmídico. El análisis de los aislamientos plasmídicos mostró la presencia en la totalidad de las transcojugantes de una banda de 25000 pb y en un 80 por ciento se evidenció una banda plasmídica mayor a 50000 pb. Se pudo constatar la cotransferencia de resistencia a otras familias de antibióticos.