Rendimento de células, esenquimais do tecido adiposo submetidas a diferentes protocolos de extração / Adipose-derived mesenchymal cells yield under different cell extraction protocols

RESUMO

Objetivo: Estabelecer um protocolo de extração de células mesenquimais do tecido adiposo, a partir da avaliação do rendimento celular em dois métodos de digestão enzimática do tecido. Material e Métodos: Fragmentos de tecido adiposo foram extraídos da região inguinal de camundongos e processados por dois protocolos distintos Grupo 1 – digestão enzimática com colagenase I; Grupo 2 – digestão enzimática com colagenas e I e tripsina/EDTA, ambos por 1 hora a 37°C.No terceiro subcultivo (P3) as células dos dois grupos foram submetidas a contagem em Câmara de Neubauer para avaliação da proliferação celular e obtenção da curva decrescimento nos intervalos de 24, 48 e 72 horas. Foi realizada a marcação pelo DAPI no intervalo de 72 horas, nos grupos estudados, para avaliar a existência de danos morfológicos nucleares. Os dados foram analisados estatisticamente, com nível de significância de 5%. Resultados: Os dois grupos exibiram um padrão de crescimento celular ascendente. As médias das contagens celulares demonstraram uma maior proliferação celular no grupo I, com diferença estatisticamente significante entre os grupos nos intervalos de 48 e72 horas (p<0,05). Alterações morfológicas nucleares não oram observadas nos grupos. Conclusão: A digestão enzimática do tecido adiposo por colagenase I, sem associação com a tripsina, proporcionou melhor rendimento das células mesenquimais, o que favorece a escolha desse protocolo em experimentos com este tipo celular.

ABSTRACT

Objective: To establish a protocol for extraction of adipose derivedmesenchymal cells, evaluating the cell yield in twomethods of tissue enzymatic digestion. Material and Methods:Fragments of adipose tissue were removed from the inguinal region of mice and processed by two different protocolsGroup 1 - enzymatic digestion with collagenase I; Group 2 -enzymatic digestion with collagenase I and trypsin/EDTA,both for 1 hour at 37°C. In the third passage (P3), cells fromboth groups were counted in a Neubauer chamber forevaluation of cell proliferation, and growth curves were plottedat intervals of 24, 48 and 72 hours. The DAPI nuclear stainingwas performed in both groups in a 72-hour interval to evaluatethe presence of nuclear morphological damage. Data wereanalyzed statistically with a significance level of 5%. Results:The two groups showed an upward pattern of cell growth.The mean cell counts showed a higher cell proliferation ingroup I, with a statistically significant difference betweengroups in intervals of 48 and 72 hours (p<0.05). Nuclearmorphological changes were not observed in the groups.Conclusion: The enzymatic digestion of adipose tissue bycollagenase I, without association with trypsin, improves theyield of mesenchymal cells, what suggests the choice ofthat protocol in experiments with this cell type.