Amplificación del gen de la ADN polimerasa I por multiplicación del Lambda polA mediante ciclo lítico en la E. coli WK6: obtención y purificación de la enzima / Amplification of the gene for DNA polimerasa I by the multiplication of Lambda polA in E. coli WK6: obtention and purification of the enzyme

RESUMEN

El fago Lambda polA (Qam 73, Sam 7) fue aislado y purificado de un lisógeno de la E. coli 594, y posteriormente se multiplicó en una cepa SupE, SupF. Se obtuvo una cantidad considerable de DNA polimerasa I multiplicándolo por vía ciclo lítico, tras la infección a alto MOI (Multiplicity of Infection) de una cepa libre de supresores amber (E. coli WK6). En este trabajo se muestran los resultados de la estandarización de las condiciones para obtener un nivel adecuado de expresión del gen polA, el esquema de purificación utilizado y se discuten las modificaciones realizadas para la obtención de la DNA polimerasa I a gran escala. La DNA pol I purificada incorporó P32-dATP por Nick translation en fragmentos de DNA entre 800-50 000 bp con un alto marcaje específico