Cuantificación de interferón alfa 2b humano recombinante mediante anticuerpos monoclonales / Quantitation of recombinant human alpha 2b interferon with monoclonal antibodies

RESUMEN

Se obtuvieron hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales (AcM) contra el IFN alfa-2 humano recombinante (rh*IFN) mediante la hibridación de linfocitos esplénicos de ratones inmunizados y el mieloma P3/x63.Ag8.653. En el tamizaje de las células secretoras de anticuerpos específicos se emplearon sistemas microELISA, con el antígeno unido directamente a la fase sólida, o mediante otro AcM anti rh*IFN. Se seleccionaron nueve clones de hibridomas específicos para rh*IFN, de los cuales se escogió el secretor de AcM denominado CB-IFNA2.4 para los experimentos de desarrollo de un sistema ELISA tipo sandwich. Empleando el AcM CB-IFNA2.3 como anticuerpo de captura y el CB-IFNA2.4 conjugado con peroxidasa, se construyó un sistema ELISA sandwich capaz de detectar 1 ng de antígeno por milimetro. Se realizó un estudio de optimización de los diferentes pasos del ELISA y del reconocimiento del antígeno, cuando este es sometido a distintos tratamientos desnaturalizantes. Este sistema se ha empleado exitosamente en el seguimiento del proceso de producción y purificación del rh*IFN. En experimentos preliminares con ratas inoculadas con esta molecula, se denostró que este ELISA puede detectar su presencia en suero