Efecto de la dibucaína sobre la SERCA del músculo pterigoideo interno / Drug action of dibucaine on the SERCA from medial pterygoid muscle

RESUMEN

Objetivo: Determinar el efecto del anestésico local di-bucaína sobre las principales isoformas de la SERCA (calcio ATPasa de retículo sarco-endoplásmico) pre-sentes en músculo pterigoideo interno. Métodos: Se aislaron por centrifugación diferencial membranas de retículo sarcoplásmico de pterigoideo interno de conejo neozelandés macho (n=5). Se separaron las isoformas SERCA1a, 2a y 2b por cromatografía de afinidad. Se determinó in vitro la actividad enzimá-tica en presencia de diferentes concentraciones de dibucaína (0-90 mM) por el método de Fiske y Subba-row, realizando 5 experimentos por duplicado y en paralelo para cada isoforma. Se calculó la media y ES de la CI50 (mM) del anestésico para cada isofor-ma y éstas se compararon por ANOVA de una vía (p<0,05), y prueba Student-Newman-Keuls de com-paraciones múltiples. Resultados: Dibucaína inhibió la actividad enzimática en función de su concentra-ción en las tres isoformas en estudio. Las CI50 fueron SERCA1a 20,02 ± 0,64 mM, SERCA2a 15,03 ± 0,52 mM y SERCA2b 16,00 ± 0,51 mM y resultaron signi-ficativamente diferentes (F2,27 = 11,08, p<0,001). La prueba post hoc identificó diferencias significativas entre SERCA1a y 2a, 1a y 2b. El efecto inhibitorio re-sultó significativamente mayor sobre las isoformas 2a y 2b, cuya presencia es sustancialmente mayor en músculos masticadores. Conclusión: La dibucaína inhibe a la SERCA de pterigoideo interno a concen-traciones menores que las usadas en clínica médica (29 mM). Es un anestésico local con potencial efecto miotóxico derivado de la inhibición de la SERCA (AU)

ABSTRACT

Aim: To test the effect of the local anesthetic dibu-caine on the main isoforms of the SERCA (sarco-endosplasmic reticulum calcium-ATPase) in medial pterygoid muscle. Methods: Sarcoplasmic reticulum membranes from male New Zealand rabbits (n=5) were isolated from medial pterygoid muscle by ul-tracentrifugation. The isoforms SERCA1a, 2a and 2b were separated using high affinity chromatography. In vitro enzymatic activity determinations were per-formed in the presence of different dibucaine con-centrations (0-90 mM) using the colorimetric method described by Fiske & Subbarow. Five assays in dupli-cate and run in parallel were performed for each of the isoforms. Mean and SEM of the IC50 (mM) for the effect of the anesthetic on each isoform were calcu-lated and compared by one-way ANOVA (p<0.05), and Student-Newman-Keuls multiple comparisons test. Results: Dibucaine inhibited the enzymatic activity in a concentration-dependent manner for the three studied isoforms. The IC50 values were SERCA1a 20.02 ± 0.64 mM, SERCA2a 15.03 ± 0.52 mM and SER-CA2b 16.00 ± 0.51 mM. The values were significantly different (F2.27 = 11.08, p<0.001). The post hoc test revealed significant differences between SERCA1a and 2a, 1a and 2b. The inhibitory effect was signifi-cantly higher on 2a and 2b isoforms, whose presence is substantially higher in masticatory muscles. Con-clusion Dibucaine inhibits SERCA in medial pterygoid muscle at concentrations lower than those used in clinical medicine (29 mM). It is a potentially myotoxic local anesthetic whose toxic effect may derive from SERCA inhibition (AU)