Estudo imunomolecular dos linfomas não hodgkin de origem B na infância: correlação clínica e terapêutica

RESUMO

A proteína p53 desempenha um papel central nas respostas celulares dentre as quais se incluem o controle do ciclo e da morte celular induzida por dano ao DNA, como aquele causado por muitos agentes quimioterápicos e radiação utilizados no tratamento do câncer. O propósito deste estudo foi descrever as funções biológicas da proteína p53 e investigar o seu papel nos linfomas não Hodgkin de origem B da infância. Adicionalmente, nós também estudamos os tipos histológicos e a prevalência da infecção pelo vírus Epstein-Barr e sua correlação com os achados clínicos patológicos. Uma série de crianças com linfoma não Hodgkin B foi estudada com relação aos subtipos histológicos, características clínicas, mutações do gene TP53 e expressão das proteínas p53, Ki-67 e mdm2. A detecção de mutações do gene TP53 foi realizada através da técnica de PCR-SSCP dos exons 5-8/9 e seqüenciamento direto em 49 do total de 61 pacientes da série. As mutações do gene TP53 foram detectadas em 22.5por cento dos pacientes analisados, em 20por cento dos pacientes com linfoma de Burkitt. A análise das seqüências destes casos mostrou a presença de mutações do tipo pontual em 10 casos e uma inserção em um caso. A expressão da proteína p53 por imunohistoquímica foi realizada em 48 do total de 61 pacientes com resultados positivos em 31por cento dos casos. A proteína mdm2 foi negativa em todos os casos testados (42casos), incluindo aqueles com mutação do gene TP53. Observou-se uma alta concordância entre a expressão da p53 e a presença de mutações (p=0.0005). Não foi detectada uma correlação estatisticamente significante entre mutações e os achados clínicos. A comparação da sobrevida livre de eventos entre os grupos com e sem mutação usando o teste de Long-Rank também não foi significante. O virus EBV foi analisado por hibridização in situ e estava associado ao LB em 72por cento dos tumores(21/29 pacientes). O tipo 1 infectou a maioria dos casos(28/29). Houve uma tendência de associação entre idade mais baixa e os casos de linfoma de Burkitt associados ao EBV (mediana de 4 anos comparada a 6 anos, respectivamente, p=0.057). Também o nosso estudo sugeriu que na região sudeste do Brasil o LB tem uma associação intermediária com o EBV. Em conclusão, este estudo permitiu contribuir para uma melhor caracterização imunofenotípica e molecular dos linfomas não Hodgkin B da infância no Brasil.

ABSTRACT

p53 protein plays a central role in cellular responses, including cellcycle arrest and cell death in response to DNA damage such as that caused by many chemotherapeutic agents and radiation used in cancer therapy. The purpose of this study is to provide an outline of the biological functions of p53 and assess the role of p53 in clinical settings of childhood B non-Hodgkin's lymphoma. In order to contribute to the characterization of the B non-Hodgkin's lymphoma in this country, we also studied the prevalence and type of EBV infection and its correlation with demographic and clinical pathologic data. We investigated a series of patients with childhood B non-Hodgkin's lymphoma for hystological subtypes, clinical profiles, TP53 mutations and immunohistochemistry expression of p53, Ki-67 and mdm2 proteins. Screening for p53 mutations was made by polymerase chain reactionstrand conformational polymorphism analysis of exon 5 to 8/9 of the gene and direct sequencing in 49 out of 61 patients. Mutations of TP53 were detected in 22.5% of patients analyzed and more specifically in 20% of Burkitt's lymphoma. The sequence analysis showed missense mutations in 10 cases and an insertion in one case. The p53 immunostaining positivity was performed in 48 out of 61 patients. The overall frequency of p53 immunostaining positivity was 31 %. The mdm2 expression was negative in all cases tested (42 cases) including the patients with TP53 mutations. There was a very good agreement between expression and the presence of TP53 mutation (P = 0.0005). No significant correlation was found regarding age, gender, clinical stage and LDH level and TP53 mutations. Comparisons of EFS curves using the Logtest were also not significant. EBV was detected by in situ hybridization in 21 of 29 BL (72%) and 1 virus infected the majority of EBV positive BLs (18/21). There was a for younger age in children with EBV positive BL compared with EBV negative BL (median age of 4 years, compared to 6 years, respectively; p = 0.056 ). In addition, our study suggested that in the Southeast of Brazil, BL an intermediate association with EBV. In conclusion, with this study it was possible to contribute with a ecular and immunological profile of childhood B non - Hodgkin limphoma in children from Brazil.