Normalización de un western-blot para el estudio de sobrenadantes y liquidos asciticos de hibridomas de ratón anti-VIH / Standarization of western blot for studying supernatants and ascitic fluids of anti-HIV murine hybridomas

RESUMEN

Se utilizó el sistema conservatorio de detección de anticuerpos al VIH-1 "DAVIH-blot", basado en la inmunoelectrotransferencia y desarrollado en nuestros laboratorios como sistema de confirmación para sueros humanos, como sistema de referencia para normalizar una variante adecuada para el estudio de sueros de ratones hiperinmunes, líquidos ascíticos y sobrenadante de cultivo de hibridomas de ratón. Se compararon las siguientes variaciones de la etapa inmunológica soluciones amortiguadoras para la dilución de las muestras y conjugados, soluciones bloqueadoras, temperatura y tiempo de incubación, y se determinaron las condiciones experimentales óptimas usar como solución amortiguadora para la dilución de las muestras y conjugados, una solución de Tris-0,02M-NaCl0,5 con Tween-20 al 0,05 %(TNT), no usar solucion bloqueadora antes de la adición del conjugado e incubar el antisuero conjugado 1 hora a 37 -C