Construcción de vectores de integración de saccharomyces cerevisiae y su aplicación en el genoma de neurospora crassa / Construction of integrating vectors of saccharomyces cerevisiae and their application in the genome of neurospora crassa

RESUMEN

El presente trabajo describe la construcción de tres vectores de integración y un vector de replicación autonoma de Saccharomyces cerevisiae. Dichos vectores se caracterizan por poseer el gen LEU2 de levadura y los genes de resistencia a ampicilina y tetraciclina que sirven como marcadores geneticos en Escherichia coli. Por otro lado, el gen LEU2 puede ser utilizado en la selección de transformantes de Sacharomyces cerevisiae. Los plásmidos VCp1, VCp2,1, VCp2,2 y VCp2,3 transforman a la levadura en baja frecuencia (aproximadamente 10 transformantes/ug de DNA) y se comportan como vectores de integración verdaderos. Los plásmidos VCp1 y VCp2,1 fueron utilizados para la construcción de dos genotecas de Neurospora crassa a fin de aislar secuencias de replicación autónoma de Neurospora en levadura. A partir de la genoteca en VCp1, se pudo aislar un plásmido portador de un inserto que corresponde a un fragmento de 3,5 kb de DNA del hongo